[發明專利]免疫測定產品和過程

有效

• 申請號: 201610929085.0
• 申請日: 2012-05-10
• 公開（公告）號: CN107064491B
• 公開（公告）日: 2019-05-28
• 發明（設計）人: C.斯科特;P.克拉克;K.E.格林尼真;R.A.阿馬拉;R.科隆納
• 申請（專利權）人: EMD密理博公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;B01L3/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李雪瑩;劉林華

一種免疫測定產品和過程。本文公開的實施例涉及在對印跡膜上的化合物進行檢測時有用的設備。該設備包括多個層，包括在（一個或多個）印跡膜下面的多孔支撐層、在（一個或多個）印跡膜上面的流量分配器和任選地在流量分配器上的阱，阱將液體容納到期望區域并允許此類液體的較低起始體積。優選地，流量分配器是非結合或低結合親水多孔膜，諸如0.22微米膜，并且支撐層是格柵或燒結多孔材料。分配器和支撐體被保持在一起以在（一個或多個）膜周圍形成封套。在這樣做時，優選地使用鉸鏈、夾持件及其他此類裝置。

本申請是以申請號為201280022626.1、申請日為2012年5月10日的原申請為基礎所提出的分案申請。

技術領域

本文公開的實施例涉及用于檢測和定位包含在印跡膜中的物質的設備和過程。更特別地，其涉及一種用于向印跡膜施加試劑、洗液和檢測化學的技術，以經由真空或正壓的使用而快速地實現此檢測。

背景技術

凝膠電泳的使用當前是用于生物材料的分離的普遍技術。非生物材料也能夠使用凝膠或其他色譜支持來分離，但是相對于生物制劑的努力范圍更大。典型的應用包括序列確定背景下；多形態檢測中；或者其他背景下的尺寸驗證中的各種尺寸的核酸片段的分離。還頻繁地執行的是蛋白質、糖蛋白、蛋白質片段的分離和凝膠分離作為均勻性或純凈度的驗證、翻譯后改性的識別和分子量確認的應用。

在所有這些程序中，生物實體的混合樣本被施加于電泳凝膠，并且通過跨凝膠施加電場來分離各組分。無論用來使凝膠顯影的方式如何，都必須以某種方式來檢測結果產生的包含在樣本中的物質的遷移的圖案。

為了執行此檢測，通常，使凝膠支撐體與印記膜接觸，物質被以其出現在凝膠上的相同圖案傳輸到該印記膜。然后至少通過用蛋白質或洗滌液阻斷膜來檢測“斑點”以減少非特定粘合（否則其將導致高水平的噪聲和低水平的檢測）。典型的阻斷劑包括干酪素、牛血清白蛋白（BSA）、具有TWEEN?表面活性劑的緩血酸胺鹽溶液（TBS-T溶液）中的脫脂奶粉（一般地約1-5%）或具有TWEEN?表面活性劑的磷酸鹽緩沖鹽溶液（PBS-T溶液）。然后用膜上的抗原所特定的抗體來培育生物實體。然后全面地洗滌膜以去除任何污染物、未結合阻斷蛋白質或抗體等。然后用一級抗體所特定的二級酶、放射性同位素、氟（fluorfluor）或生物素偶聯抗體來處理和培育膜。然后全面地洗滌膜以去除未結合二級抗體。然后，施加檢測試劑，一般地為發色、化學發光、熒光、放射性或鏈親和素標簽材料，其結合到或者是酶偶聯劑培養基。最后，使用適當的檢測設備來確定生物實體的存在、不存在、位置、量等。最后六個步驟一般花費從3-6個小時至整夜，這取決于所選試劑、膜和生物實體之間的反應速度。該過程要求膜在搖動或其他適當的混合平臺上的多個培育時段。其是大多數研究人員不喜歡的冗長過程且消耗（浪費）大量的試劑。

某些研究人員已經建議使用吸收劑材料的毛細管作用，諸如放置在膜下面的濾紙，以通過膜吸取剩余流體并改善該過程、尤其是洗滌步驟的速度。

US 5,155,049提到了一種由Hoefer Scientific Instruments公司銷售的稱為Hybrid-Ease?雜交室的系統。此室包括膜被夾在其之間的兩個格柵。格柵板被卡合到圍繞膜的位置，以及配合到由格柵產生的開放空間中的注射器。一個注射器被用來施加試劑和洗滌，并且另一個用來收回多余量。該系統要求大量的液體以便進行操作，采用起來是麻煩的，并且仍是相當耗時的。其還提到在某些特定試驗中，諸如ELISA試驗，在小體積阱中（諸如96孔微量滴定板）中，其他人已使用真空來在洗滌步驟中通過膜吸取液體。然而，這使其努力打折扣，因為其僅在小體積應用中可用且仍是不可控的。他們替代地建議更好的方法是使用在濾紙頂部和覆蓋層上具有膜且然后壓緊被夾在兩個板之間的膜以擠壓液體通過膜并進入紙中的手動壓力機。

在2005年12月3日提交的USSN 60/732,994中，有人建議人們使用由多個層形成的設備，其包括在一層或多層印跡膜下面的多孔支撐層、在印跡膜上面的流量分配器和在流量分配器上以將液體包含在期望區域并允許此類液體的較低起始體積的阱。優選地，該流量分配器是非結合或低結合多孔膜。