[發(fā)明專利]基于金納米粒子的靶向表皮生長因子受體EGFR的人工抗體及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610927137.0
• 申請日: 2016-10-31
• 公開（公告）號: CN106699890B
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 曹傲能;汪坤;王海芳
• 申請（專利權(quán)）人: 上海大學(xué)
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28
• 代理公司: 上海上大專利事務(wù)所(普通合伙) 31205
• 代理人: 顧勇華

本發(fā)明涉及基于金納米粒子的靶向表皮生長因子受體EGFR（epidermal growth factor receptor）的人工抗體及其制備方法。該人工抗體的特征是由金納米粒子和一段設(shè)計的多肽序列組成，通過重構(gòu)多肽在納米金表面的構(gòu)象，從而制備出納米金人工抗體。由于該人工抗體具有特異性識別EGFR的性能，并且結(jié)合力強、穩(wěn)定性好，因此可以利用這種人工抗體特異性的靶向腫瘤細胞表面過表達的EGFR，并且這種具有特異性識別EGFR功能的人工抗體在疾病診斷、靶向治療、光熱治療和藥物載帶等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種靶向表皮生長因子受體EGFR（epidermal growth factorreceptor）的人工抗體及其制備方法。特征是一種基于金納米粒子的靶向表皮生長因子受體EGFR的人工抗體及其制備方法。

背景技術(shù)

定向輸送納米顆粒到達腫瘤部位對于納米藥物在生物體內(nèi)分子成像和靶向治療等領(lǐng)域至關(guān)重要。近年來，為了解決納米顆粒和靶點位置結(jié)合力差和特異性低的問題，人們越來越多的通過將天然抗體結(jié)合到納米顆粒上，利用抗體和抗原的高特異性和強結(jié)合力的性質(zhì)，從而將納米顆粒定向輸送到靶點位置并且可以延長納米顆粒在體內(nèi)的循環(huán)時間。

研究發(fā)現(xiàn)在許多實體腫瘤中存在EGFR的高表達，EGFR與腫瘤細胞的增殖、血管生成、腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移及細胞凋亡都有一定的關(guān)系。因此，EGFR作為一個靶向腫瘤細胞的重要靶點被越來越多的研究和利用，并且EGFR的天然抗體西妥昔單抗和帕尼單抗已經(jīng)被成功地應(yīng)用到腫瘤的臨床治療中。然而天然抗體存在自身的缺陷，例如穩(wěn)定性差、價格昂貴，因此合成一種穩(wěn)定性好并且能夠特異性結(jié)合EGFR的人工抗體對于納米藥物在生物體內(nèi)分子成像、靶向治療和藥物載帶具有重要價值。

由于納米金具有生物相容性好、比表面積大和易于表面修飾等優(yōu)良特性，這使其在細胞檢測、藥物合成和運輸、光化學(xué)治療等方面具有廣泛的應(yīng)用價值。因此通過功能化納米粒子制備能夠靶向EGFR的納米藥物已經(jīng)被廣泛的研究，然而這些納米藥物主要是通過將具有特異性識別EGFR功能的蛋白質(zhì)抗體修飾到納米粒子表面，利用修飾的蛋白質(zhì)抗體的腫瘤靶向性從而將納米藥物輸送到腫瘤部位。雖然這種方法合成的納米藥物具有較好的腫瘤靶向性，但是由于大分子蛋白質(zhì)抗體提取困難并且穩(wěn)定性差，使得這種方法合成的納米藥物與EGFR的結(jié)合力低、穩(wěn)定性差并且制備成本高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一在于提供一種基于金納米粒子的靶向表皮生長因子受體EGFR的人工受體。

本發(fā)明的目的之二在于提供該人工受體的制備方法。

為達到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種基于金納米粒子的靶向表皮生長因子受體EGFR的人工受體，由金納米粒子以及多肽組成，其特征在于所述的多肽由識別區(qū)、兩個調(diào)控區(qū)和兩個固定區(qū)組成；所述的識別區(qū)的兩端各連接一個調(diào)控區(qū)；而在調(diào)控區(qū)的兩端各連接一個固定區(qū)；該多肽通過其兩端的固定區(qū)固定在金納米粒子表面從而形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)；

所述的調(diào)控區(qū)用來調(diào)節(jié)多肽的長度，由0～8個非半胱氨酸的氨基酸序列隨機排列組成；

所述的固定區(qū)通過巰基和納米金表面自發(fā)形成S-Au鍵，從而將所述多肽兩端固定在金納米粒子表面，每1nm²金納米粒子表面積上固定0.05～2個所述多肽，從而使多肽在金納米粒子表面形成環(huán)狀構(gòu)象。

上述的識別區(qū)的氨基酸序列為AWYGTLYEYD、AWYGTVYEYD、SWYGTLYEYD或AWYGSLYEYD。

上述的固定區(qū)為：半胱氨酸或?qū)в袔€基的聚乙二醇通過脫水縮合修飾在調(diào)控區(qū)的兩端形成固定區(qū)。

上述的組成調(diào)控區(qū)的氨基酸為：甘氨酸、絲氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺和天冬酰胺。。