[發明專利]檢測副豬嗜血桿菌的交叉引物擴增引物組、試劑盒及應用

有效

• 申請號: 201610913751.1
• 申請日: 2016-10-20
• 公開（公告）號: CN106834432B
• 公開（公告）日: 2020-09-29
• 發明（設計）人: 勾紅潮;李春玲;宋帥;李淼;蔡汝健;蔣智勇;李艷;楊冬霞;楚品品
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院動物衛生研究所
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/21
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發明公開了一種檢測副豬嗜血桿菌的交叉引物擴增引物組、試劑盒及應用。該引物組包含核苷酸序列如SEQ ID NO.1～6所示的引物組；試劑盒包括上述的引物組和核酸試紙條；該試劑盒的使用方法如下：首先配制交叉引物擴增反應體系；恒溫反應所得產物用核酸檢測試紙條檢測后直接進行判讀：陽性結果為出現兩條條帶，一條位于檢測區內，另一條位于質控區內。該試劑盒操作簡單、成本低廉，反應結果易于觀察，特異性好，非常適用于出口檢疫、食品衛生以及畜牧養殖場的現場檢測，易于大范圍推廣應用。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體地說，涉及一種副豬嗜血桿菌的交叉引物擴增快速檢測試劑盒及應用。

背景技術

副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis,Hps)是豬上呼吸道的一種常在機會致病菌，可在特定的條件下侵入機體，引起以漿液性、纖維素性多發性漿膜炎、關節炎、呼吸困難、高熱及高死亡率為特征的傳染性疾病，尤其對早期斷奶仔豬的危害較大。隨著規模化養豬業的發展，副豬嗜血桿菌病對養豬業的危害范圍也正在擴大，給養豬業帶來了巨大經濟損失。

雖然副豬嗜血桿菌病一般通過疫苗接種和抗生素治療進行控制，但準確的病原診斷卻是對該病進行控制與凈化的重要前提。目前，細菌分離仍是鑒定副豬嗜血桿菌的標準方法，但由于副豬嗜血桿菌具有嬌嫩、生長緩慢、對生長條件的要求較高等特點，導致許多實驗室很難掌握副豬嗜血桿菌的分離培養技術。因此，為了克服這個難題，針對病原核酸擴增的分子診斷方法已被研究和應用。Angen等(Angen,O.and S.Oliveira,et al.(2007).Development of an improved species specific PCR test for detection ofHaemophilus parasuis.Vet Microbiol 119(2-4):266-76.)在2006年建立的副豬嗜血桿菌PCR檢測技術雖然能夠快速的檢測出副豬嗜血桿菌，但是該方法的敏感性相對不足。另外，PCR檢測技術在擴增過程中需要昂貴的熱循環功能儀與熟練的操作人員，妨礙該技術在獸醫基層進行廣泛的應用與推廣。

發明內容

有鑒于此，本發明針對上述的問題，提供了一種副豬嗜血桿菌的交叉引物擴增快速檢測試劑盒及應用，該試劑盒具有高特異性、高敏感性、可視化、操作方法簡單的特點。

為了解決上述技術問題，本發明公開了一種檢測副豬嗜血桿菌的交叉引物擴增引物組，由外部引物F3、外部引物B3、置換引物F1、置換引物F2、交叉引物CPR和探針Probe組成；

外部引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

外部引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

交叉引物CPR的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

置換引物F1的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

置換引物F2的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

探針Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

進一步地，置換引物F1的5’末端標記生物素Biotin；探針Probe的3’末端標記Fitc。

本發明還公開了一種檢測副豬嗜血桿菌的交叉引物擴增試劑盒，包括上述的檢測副豬嗜血桿菌的交叉引物擴增引物組和核酸試紙條。

進一步地，核酸檢測試紙條為通用型核酸檢測試紙條。

進一步地，該試劑盒還包括全封閉式靶核酸擴增物快速檢測裝置，該全封閉式靶核酸擴增物快速檢測裝置為將通用型核酸檢測試紙條置入一個掌上塑料檢測裝置內得到。