[發(fā)明專利]一種用于同時(shí)檢測(cè)NBPF10、TSFM、PRB2及DIAPH1基因突變的試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610911554.6
• 申請(qǐng)日: 2016-10-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107974502B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 阮國(guó)瑞;黃曉軍;吳利新;劉開(kāi)彥;李金蘭;周嬌;李玲娣;龍玲玉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京大學(xué)人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/6886
• 分類號(hào): C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;白艷

本發(fā)明公開(kāi)了一種用于同時(shí)檢測(cè)NBPF10、TSFM、PRB2及DIAPH1基因突變的試劑盒。本發(fā)明的試劑盒包括一攬子多基因捕獲探針，可以用于檢測(cè)腫瘤基因組層面的體細(xì)胞突變和胚系突變，且檢測(cè)方法簡(jiǎn)便、靈敏，可用于血液腫瘤患者(特別是急性淋巴細(xì)胞白血病患者)的輔助診斷、微小殘留病監(jiān)測(cè)和預(yù)后的評(píng)估等，將在醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于同時(shí)檢測(cè)NBPF10、TSFM、PRB2及DIAPH1基因突變的試劑盒。

背景技術(shù)

急性淋巴細(xì)胞白血病(acute lymphocytic leukemia,ALL)是起源于淋巴系統(tǒng)的一種惡性血液腫瘤。ALL臨床異質(zhì)性極高，主要臨床表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)增多、貧血、皮膚和牙齦出血、肝脾腫大以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)浸潤(rùn)。是嚴(yán)重危害我國(guó)兒童、青壯年第一位的惡性腫瘤。目前盡管新型藥物治療如酪氨酸激酶抑制劑以及造血干細(xì)胞移植等明顯提高了ALL患者完全緩解率和長(zhǎng)期存活率，但仍有約10-30％的兒童ALL患者和30-50％的成人ALL患者，復(fù)發(fā)和死亡的結(jié)局不可避免。其根本原因在于對(duì)其發(fā)病及進(jìn)展的具體分子機(jī)制和調(diào)控機(jī)理尚不明確；精準(zhǔn)診斷/分型和個(gè)體化治療存在盲區(qū)。目前國(guó)際上通用的MICM(Morphology、Immunology、Cytogenetics、Molecular)分型標(biāo)準(zhǔn)已不能滿足臨床需要。國(guó)內(nèi)的診斷治療水平雖然接近或達(dá)到國(guó)際水平但未能有新的發(fā)現(xiàn)。分層診斷體系的不完善成為制約ALL患者療效進(jìn)一步提高的瓶頸之一，而新型生物學(xué)標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn)是實(shí)現(xiàn)ALL個(gè)體化治療的必經(jīng)之路。

人類DIAPH1基因位于5q31.3，編碼形成素蛋白mDia，屬于Rho效應(yīng)蛋白，主要與肌動(dòng)蛋白聚合作用、穩(wěn)定微管有關(guān)，從而影響細(xì)胞的形態(tài)以及黏附、遷移、分裂等功能，并參與疾病的發(fā)生發(fā)展。家系研究發(fā)現(xiàn)，人類DIAPH1純合失活突變與多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病相關(guān)，包括小頭畸形、早發(fā)癲癇、視力障礙、智力障礙等。其中小頭畸形等改變由mDia(DIAPH1)失活引起，而聽(tīng)力喪失是由于DIAPH1剪接供體發(fā)生了G-T替換，合成的蛋白在C末端縮短了32個(gè)氨基酸所致。Keerthivasan等表明DIAPH1雜合突變或缺失主要影響造血系統(tǒng)粒細(xì)胞及其定向祖細(xì)胞。這些粒細(xì)胞膜CD14過(guò)度表達(dá)，并通過(guò)CD14/TLR4信號(hào)傳導(dǎo)通路導(dǎo)致超敏先天性免疫反應(yīng)，粒細(xì)胞減少，促進(jìn)MDS(5q-)發(fā)生。DIAPH1可建立和維持細(xì)胞正常的遷移和極性。但癌細(xì)胞中DIAPH1和RhoA通過(guò)正反饋調(diào)節(jié)細(xì)胞的形態(tài)和浸潤(rùn)行為。多項(xiàng)研究均表明，mDia在癌細(xì)胞的表達(dá)水平上升，與癌細(xì)胞的浸潤(rùn)傾向、更短的無(wú)病生存率相關(guān)。而敲除DIAPH1基因或下調(diào)mDia表達(dá)后癌細(xì)胞浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移事件顯著減少。

NBPF10基因?qū)儆谏窠?jīng)母細(xì)胞瘤斷點(diǎn)家族，位于1號(hào)染色體上。該家族以編碼DUF1220蛋白結(jié)構(gòu)域的串聯(lián)重復(fù)序列為特征。編碼DUF1220結(jié)構(gòu)域最多的區(qū)域?yàn)?q21.1，研究顯示該區(qū)域與許多發(fā)育性和神經(jīng)源性疾病相關(guān)，包括小頭畸形、大頭畸形、孤獨(dú)癥、精神分裂癥、精神發(fā)育遲滯、先天性心臟病、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、先天性腎臟和泌尿道畸形等。該基因表達(dá)的異常還與某些腫瘤發(fā)生相關(guān)，如Manson-Bahr等通過(guò)對(duì)前列腺癌患者活檢組織DNA序列分析，發(fā)現(xiàn)前列腺癌患者存在多種基因突變，其中NBPF10基因突變屬于錯(cuò)義突變；Li等通過(guò)對(duì)8532個(gè)基因的研究首次發(fā)現(xiàn)NBPF10基因在多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中表達(dá)上調(diào)；Zhang等通過(guò)對(duì)肺癌患者1號(hào)染色體基因分析得出，NBPF9基因(NBPF10基因別稱)在肺腺癌四個(gè)分期中均表達(dá)上調(diào)，而NBPF10基因在肺鱗癌中表達(dá)下調(diào)。2013年一篇研究骨髓增生異常綜合征(MDS)的文獻(xiàn)中報(bào)道，在MDS中發(fā)現(xiàn)了NBPF10的頻繁突變，而MDS具有很高風(fēng)險(xiǎn)患急性髓性白血病。還有一篇與慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)相關(guān)文獻(xiàn)中表明，NBPF10在CLL中是一個(gè)驅(qū)動(dòng)基因，作者用蛋白結(jié)構(gòu)域的頻率作為一個(gè)變量通過(guò)二進(jìn)制輸出方法尋找CLL中的驅(qū)動(dòng)突變，共發(fā)現(xiàn)10個(gè)常見(jiàn)蛋白結(jié)構(gòu)域與對(duì)應(yīng)的基因，其中包括NBPF10。此外，還發(fā)現(xiàn)NBPF10與其他腫瘤相關(guān)。2014年一篇研究膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)的報(bào)道中表明，NBPF10在GBM中表達(dá)上調(diào)；2015年一篇應(yīng)用二代測(cè)序研究前列腺癌的文獻(xiàn)中，作者在8例樣本的其中一例中檢測(cè)到了NBPF10突變。