[發明專利]一種制備骨誘導成骨制劑的方法

在審

• 申請號: 201610906514.2
• 申請日: 2016-10-17
• 公開（公告）號: CN107496987A
• 公開（公告）日: 2017-12-22
• 發明（設計）人: 邊俊杰
• 申請（專利權）人: 浙江善時生物藥械（商丘）有限公司
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/22;A61L27/54;A61K35/32;A61K38/18;A61P19/08
• 代理公司: 杭州天昊專利代理事務所(特殊普通合伙)33283
• 代理人: 向慶寧

1.一種制備骨誘導成骨制劑的方法，該方法包括如下步驟：1.對外源骨基質進行脫鈣處理；2.然后再對經過脫鈣處理的骨基質進行去除蛋白；3.讓外源骨形態發生蛋白與經過步驟2處理的骨基質進行混合，讓外源蛋白與估計值形誘導成骨制劑。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述的骨骼為人骨骼，對人骨進行脫鈣處理的步驟如下：(1)、將收集的人骨入清水容器內，在攝氏5度以下條件儲存；(2)、用1.2％d次氯酸鈉浸泡消毒原料骨骼，時間為30-55分鐘、溫度為攝氏35-40攝氏度；(3)、去除骨骼上無使用價值的部分；(4)、用機械方法將骨骼組織粉碎成顆粒劑或者凍干粉，平均粒徑為0.10-0.25毫米；(5)、再用1.2％的次氯酸鈉浸泡消毒粉碎成顆粒劑或者凍干粉的骨骼組織，浸泡消毒時間為10-45分鐘、溫度為攝氏35-40度；(6)、將骨骼組織顆粒劑或者凍干粉置入到0.65-0.72當量鹽酸液浸泡，在38攝氏度下浸泡16-20小時完成脫鈣；(7)、低溫干燥，獲得脫鈣的骨基質粉末或者顆粒。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中，對步驟已經脫鈣骨骼處理后的骨骼基質進行提取蛋白的處理的方法如下：a、首先把處理的脫鈣骨骼質除去雙氧水，用滅菌水沖洗多次直至無雙氧水存在；獲得骨骼基質粉末；然后讓脫鈣的骨骼粉末1000克懸浮在2升PH＝7.2的磷酸鹽緩沖液中；b、讓酶解鍋內溫度調至48-50℃，pH值調至8.5時加入胰酶O.35g；酶的反應時間均為12-56小時,進行蛋白的降解處理；處理結束后，進行離心分離上清液和沉淀，去除上清液，保留沉淀，并進行干燥，獲得脫鈣、脫蛋白的骨骼粉末顆粒。

4.根據權利要求1所述的方法，其中，然后讓脫鈣，脫蛋白的骨骼粉末懸浮在PH＝7.2的磷酸鹽緩沖液中。

5.根據權利要求4所述的方法，其中，把外源BMP用PH＝7.2的磷酸鹽緩沖液溶解，然后與包含脫鈣，脫蛋白的骨骼粉的磷酸鹽緩沖液兩者混合在一起，放到攪拌機器上進行勻速緩慢攪拌，攪拌的速率為20-120轉/分鐘進行攪拌，同時處于變溫的水浴鍋內。

6.根據權利要求5所述的方法，其中，水浴鍋的溫度順次如下：26攝氏度，8小時；30攝氏度；6小時；28攝氏度；8小時，28攝氏度，12小時；然后保持在恒溫30攝氏度下進行繼續攪拌，每隔3小時測量一次混合溶液中BMP蛋白的濃度，直到濃度下降到初始BMP濃度的5％－6％以下停止攪拌。

7.根據權利要求6所述的方法，其中，停止攪拌后，通過離心，去掉上清液體，剩下的粉末進行過濾，然后經過低溫干燥。

8.根據權利要求1-7之一所述的方法，其中，所述的外源BMP蛋白為BMP-2、BMP-1、BMP-3BMP-4、BMP-5、BMP-6或BMP-7中的一種或者幾種。

9.根據權利要求1-8所述的方法，其中，在誘導成骨制劑中包括有維生素B2。

10.一種如權利要求1-8之一方法制備的促進骨骼增長的顆粒劑或者凍干粉制劑，其中，該實際的顆粒劑或者凍干粉細小均勻，形態一致，呈圓棒狀，長度約為122—240nm，直徑約為60一110nm；其中，促進骨骼增長的顆粒劑或者凍干粉制劑中還包括有維生素B2。