[發明專利]一種抑制bcl-2的反義寡聚核酸的脂質納米粒及其制備方法

有效

• 申請號: 201610903392.1
• 申請日: 2016-10-17
• 公開（公告）號: CN107951862B
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 程光;陳文忠;秦利利
• 申請（專利權）人: 南京綠葉制藥有限公司;南京愛賽克納米生物醫藥有限公司
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K31/7088;B82Y5/00;A61K47/26;A61K47/10;A61K47/24;A61P35/00
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 汪旭東

1. 一種抑制bcl-2的反義寡聚核酸的脂質納米粒，其特征在于，該脂質納米粒是由膜材料包裹一段反義寡聚核酸制成，所述的核酸序列為5’-TCT CCC AGC GTG CGC CAT-3’，或5’ UCU CCC AGC GTG CGC CAU 3’ 。

2.根據權利要求1所述的一種抑制bcl-2的反義寡聚核酸的脂質納米粒，其特征在于，所述的膜材料包括陽離子類脂、中性磷脂、膽固醇、吐溫、聚乙二醇衍生物，其摩爾比為（25-35）:（40-50）:（15-25）：（1-5）:（1-5）。

3.根據權利要求2所述的一種抑制bcl-2的反義寡聚核酸的脂質納米粒，其特征在于：所述的陽離子類脂包括：DOTAP、 DOTMA、DDAB、DODMA ；

所述的中性磷脂包括：Egg PC、 DOPC、DSPC、DPPC、DMPC；

所述的吐溫包括：吐溫-20、吐溫-40、吐溫-60、吐溫-80；

所述的聚乙二醇衍生物包括：mPEG-DPPE、mPEG-DMPE、mPEG-DSPE、TPGS、mPEG-cholesterol。

4.根據權利要求2或3所述的一種抑制bcl-2的反義寡聚核酸的脂質納米粒，其特征在于，所述的聚乙二醇衍生物中PEG包括單甲基聚乙二醇， 其分子量為550-5000。

5.根據權利要求4所述的一種抑制bcl-2的反義寡聚核酸的脂質納米粒，其特征在于，所述的聚乙二醇衍生物是親水的聚乙二醇鏈或甲基化聚乙二醇鏈連接到一個可以嵌入磷脂雙分子層的疏水結構上所形成的物質；所述的疏水結構為膽固醇，維生素E，二棕櫚酸磷脂酰乙醇胺,二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺, 二肉豆蔻酰甘油或結構類似物。

6.根據權利要求3所述的一種抑制bcl-2的反義寡聚核酸的脂質納米粒，其特征在于，所述的吐溫為吐溫-80。

7.根據權利要求1所述的一種抑制bcl-2的反義寡聚核酸的脂質納米粒，其特征在于，對所述的反義寡聚核酸5’ UCU CCC AGC GTG CGC CAU 3’的修飾為對其兩端的前三個核酸進行2’-O-Me修飾，并對全鏈進行硫代磷酸修飾；或者對反義寡聚核酸5’-TCT CCC AGC GTG CGC CAT-3’的全鏈進行硫代磷酸修飾。

8.一種抑制bcl-2的反義寡聚核酸的脂質納米粒的制備方法，其特征在于，所述的脂質納米粒的制備方法為乙醇逐級稀釋法，具體步驟如下：

（1）將陽離子類脂、中性磷脂、膽固醇、吐溫、聚乙二醇衍生物，按照一定的摩爾比溶解于80%的乙醇中，得混合乙醇溶液；將修飾后的反義寡聚核酸溶解在PBS緩沖液中，得到反義寡聚核酸的PBS溶液；

（2）將得到的混合乙醇溶液和反義寡聚核酸的PBS溶液等體積進行混合以得到40%的終乙醇濃度混合液；

（3）將步驟（2）所得的40%的終乙醇濃度混合液進一步用PBS溶液等體積稀釋；重復將終乙醇濃度混合液用PBS溶液等體積稀釋，直至得到乙醇終濃度低于5%的制劑混合液；

（4）向步驟（3）得到的制劑混合液加入高鹽溶液，得到含有高鹽的混合液；

（5）將步驟（4）得到的混合液用超濾或透析裝置去除乙醇和游離未被包裹的寡聚核酸；

（6）將步驟（5）得到的產品通過孔徑小于或等于0.22微米的濾膜或濾芯進行過濾除菌，即得脂質納米粒。

9.根據權利要求8中所述的脂質納米粒的制備方法，其特征在于，所述的PBS緩沖液不含有DNA酶和RNA酶，所述的步驟（1）中的PBS緩沖液的規格為1X pH=7，所述的步驟（3）中的PBS緩沖液的規格為1X pH=7.4。

10.根據權利要求8中所述的脂質納米粒的制備方法，其特征在于，所述的高鹽溶液為NaCl溶液，步驟（4）中的混合液NaCl濃度為0.1-1M。

11.根據權利要求10中所述的脂質納米粒的制備方法，其特征在于，所述的混合液的濃度為0.3-0.4M。

12.根據權利要求8中所述的脂質納米粒的制備方法，其特征在于，所述的超濾或透析裝置的截留量分子量為10,000 - 100，000道爾頓。