[發明專利]一種柑橘多倍體高效誘導與快速應用技術

有效

• 申請號: 201610899382.5
• 申請日: 2016-10-17
• 公開（公告）號: CN106613929B
• 公開（公告）日: 2018-11-16
• 發明（設計）人: 萬水林;胡鐘東;劉召亮;閆承璞;段憲明
• 申請（專利權）人: 江西省農業科學院園藝研究所
• 主分類號: A01H1/08
• 分類號: A01H1/08;A01G17/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于生物育種技術領域，其主要內容為在春季柑橘芽剛萌動時，選擇柑橘樹冠外圍或上部旺盛枝梢，并選中下部腋芽，抹除，之后在該部位用浸有0.06?0.08%秋水仙素+1%二甲基亞砜的棉球處理，封口膜綁縛、密封，再用黑色膠布包裹遮光，同時剪去處理部位上部枝梢，抹除下部萌芽。5?7天后解綁，剪除周圍的競爭性枝梢。10?15天后，復芽萌發。1.5?2月后，取葉樣用流式細胞儀檢測，多倍體誘導率達50%以上，其中95%以上為純四倍體，嵌合體在4%以下。復芽萌發后生長勢強，第2年即可開花投入應用。該方法簡單，藥劑可滲入芽體組織內部，誘導率高，嵌合率低，且可快速獲得應用，適用于所有具復芽且易萌發的作物。

技術領域

本發明專利屬于柑橘生物育種技術領域，具體涉及一種柑橘多倍體材料的誘導方法，尤其是能提高柑橘多倍體誘導效率和促使多倍體快速獲得應用的技術。

背景技術

柑橘無核以其食用方便、品質優良而深倍受人們的青睞，在鮮食和加工上均具有重要意義，無核已成為世界柑橘育種的重要方向。作物育種中，通過倍性操作，可選育出具特定倍性的作物新品種。柑橘倍性育種是現代柑橘遺傳改良的一條重要途徑，以培育三倍體和四倍體最具實際意義，其中以培育三倍體無核柑橘為研究熱點。三倍體的獲得，除極少的自然發生外，必須首先要獲得四倍體，再以四倍體為親本，與普通二倍體雜交，獲得無核三倍體，這是目前獲得柑橘三倍體的最有效途徑。因此，獲得柑橘四倍體是產生三倍體的首要條件。而要獲得柑橘四倍體，化學方法誘導是目前應用最廣泛、最有效的方法，其中應用最廣、效果最好的是秋水仙素誘導。不同的處理方法中，以田間誘導方法快捷、簡單。因秋水仙素系作用于正在分裂的細胞，柑橘田間誘導處理時一般選用萌發的種子、正在生長的幼苗、嫩梢及芽等生長旺盛組織，其中又以芽誘導最為常見。進行芽誘導時選擇的芽一般為枝梢中上部正常生長的腋芽或頂芽，采用浸漬、滴液、涂抹、注射、噴霧等方式處理。存在的主要問題是多倍體誘導率低，多在10-30%之間，嵌合體比例高等。而且，由于選擇的芽為枝梢中上部或頂部位置的芽，發芽成枝后，生長勢弱，即便除去周圍的競爭性枝條，相當長時間內仍難以開花。如采用嫩梢上的芽，則根本無法發育成為結果枝，達不到開花、應用的目的。

發明內容

本發明的主要目的：提供一種用于柑橘倍性育種的多倍體誘導技術，以解決目前柑橘活體誘導中出現的誘導率低、投入應用慢等缺點，可實現柑橘多倍體的高效誘導，且成枝能力強，可快速投入應用。

具體實施方式：1、選擇誘導藥劑：配制0.06-0.08%的秋水仙素（Colchicine）溶液，按比例加入1%二甲基亞砜（DMSO），再將適量的藥棉浸泡其中。2、選擇誘導時間：3月上中旬，春芽剛萌發時。3、選擇適宜枝梢和處理部位：選取樹冠外圍或上部生長勢強的健壯枝梢，并選擇該枝梢的中下部位的腋芽進行處理。4、誘導處理：①剪去選芽的上部枝條和選芽部位的葉片，保留葉柄；②用鑷子或手將剛萌動的腋芽抹除；③用鑷子取出適量已浸泡了誘導藥劑的藥棉，置于已抹去了萌芽的腋芽部位，保留的葉柄可起固定作用。5、綁縛：用parafilm封口膜，將藥棉、葉柄一起綁縛密封，包好后外面再用黑色膠布包裹。6、解綁：5-7天后，解除膠布、封口膜和藥棉，做好標記編號，取下的膠布、封口膜和藥棉集中帶出園外處理。7、促復芽萌發：解綁后，及時將枝梢誘導部位以下萌發的新芽或新梢抹除，并剪去周圍的競爭性枝條，促誘導部位的復芽萌發。8、檢測：1.5-2月后，取由復芽萌發的枝梢上的葉片樣品，用流式細胞儀檢測染色體倍性。

有益效果：1、流式細胞儀檢測結果表明，該發明的多倍體誘導率達50%以上，其中95%以上為純四倍體，嵌合體在4%以下；2、誘導芽成枝能力強，第2年即可開花，可供柑橘倍性育種中作親本使用。3、根據發明人試驗研究，如選取枝條上部的芽，其它同本發明一樣進行除萌芽、促復芽萌發處理，多倍體誘導率可達80%以上，但由于生長勢弱，長期內難以開花，只能成為營養枝，無法獲得應用。綜合考慮不如選取枝條中下部芽，即使誘導率稍低些，但均能順利開花并投入應用。