[發(fā)明專利]構建水稻白葉枯病菌Ⅲ型分泌系統轉運目標蛋白到植物體內的表達載體及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610899180.0
• 申請日: 2016-10-14
• 公開（公告）號: CN106636080B
• 公開（公告）日: 2019-03-26
• 發(fā)明（設計）人: 劉俊;余永旗
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/74;C12Q1/6897;C12R1/64
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;何葉喧

1.一種DNA分子，自上游至下游依次包括如下區(qū)段：區(qū)段甲、區(qū)段乙和區(qū)段丙；所述區(qū)段甲如序列表的序列1第7-524位核苷酸所示；所述區(qū)段乙如序列表的序列1第525-674位核苷酸所示；所述區(qū)段甲的3’末端核苷酸連接所述區(qū)段乙的5’末端核苷酸；所述區(qū)段丙為轉錄終止序列。

2.如權利要求1所述的DNA分子，其特征在于：所述DNA分子中，所述區(qū)段乙和區(qū)段丙之間還具有限制性內切酶的識別序列。

3.如權利要求1或2所述的DNA分子，其特征在于：所述區(qū)段丙如序列表的序列1第690-965位核苷酸所示。

4.如權利要求1所述的DNA分子，其特征在于：所述DNA分子為如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1第7-965位核苷酸所示的DNA分子；

(a2)序列表的序列1所示的DNA分子。

5.含有權利要求1至4中任一所述DNA分子的重組載體。

6.權利要求1至4中任一所述DNA分子或權利要求5所述重組載體的應用，為表達目的蛋白并將其轉運至植物細胞。

7.權利要求1至4中任一所述DNA分子或權利要求5所述重組載體的應用，為鑒定待測蛋白是否為效應蛋白。

8.一種鑒定待測蛋白是否為效應蛋白的方法，包括如下步驟：

(1)將待測蛋白的編碼基因插入權利要求5所述重組載體的所述區(qū)段乙和所述區(qū)段丙之間且所述編碼基因與所述區(qū)段乙位于同一個編碼框，得到重組質粒；

(2)將步驟(1)得到的重組質粒導入出發(fā)菌，得到重組菌；所述出發(fā)菌為水稻白葉枯病菌；

(3)分組操作如下：

實驗組：將所述重組菌導入植物，然后觀察植物發(fā)病情況；

對照組：將所述出發(fā)菌導入植物，然后觀察植物發(fā)病情況；

在平行操作的前提下，如果實驗組植物的發(fā)病程度不同于對照組植物，待測蛋白為效應蛋白；

所述效應蛋白為具有改變植物病原菌侵染宿主植物的功能的蛋白質。

9.一種鑒定待測蛋白是否為效應蛋白的試劑盒，包括權利要求5所述重組載體和水稻白葉枯病菌；所述效應蛋白為具有改變植物病原菌侵染宿主植物的功能的蛋白質。