[發明專利]用于淋巴細胞定量檢測的標記物和淋巴細胞定量檢測方法

在審

• 申請號: 201610895868.1
• 申請日: 2016-10-13
• 公開（公告）號: CN107955831A
• 公開（公告）日: 2018-04-24
• 發明（設計）人: 李新洋;武靖華;劉曉;王長希
• 申請（專利權）人: 深圳華大基因研究院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/06;C12N15/11
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司44281
• 代理人: 彭家恩,羅瑤

1.一種用于淋巴細胞定量檢測的標記物，其特征在于：所述標記物為DNA片段或者含有所述DNA片段的質粒，所述DNA片段從5’端到3’端依序包括V區、M區和J區，所述V區由前導區基因和/或V基因全部或部分連續序列組成，所述J區由J基因的全部或部分連續序列組成，所述M區包括外源核苷酸片段。

2.根據權利要求1所述的標記物，其特征在于：所述M區中，外源核苷酸片段為barcode；優選的，所述M區還包括D基因的全部或部分連續序列；優選的，所述D基因的全部或部分連續序列的長度為0bp-100bp。

3.根據權利要求1所述的標記物，其特征在于：所述V區的長度為10bp-400bp。

4.根據權利要求1所述的標記物，其特征在于：所述J區的長度為10bp-100bp。

5.根據權利要求1-4任一項所述的標記物，其特征在于：所述DNA片段的總長度為100-500bp。

6.根據權利要求1-5任一項所述的標記物在淋巴細胞定量檢測中的應用。

7.根據權利要求1-5任一項所述的標記物在免疫相關疾病的致病細胞檢測，或者在制備免疫相關疾病早期診斷或預后監控檢測試劑盒或設備中的應用。

8.一種用于免疫相關疾病的致病細胞檢測的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中含有權利要求1-5任一項所述的標記物。

9.一種淋巴細胞定量檢測的方法，其特征在于：包括在免疫組庫測序的過程中，將已知分子拷貝數的權利要求1-5任一項所述的標記物人為摻入人基因組DNA樣本中，然后對混合樣本進行免疫組庫建庫，上機測序獲得淋巴細胞的reads數，和標記物中DNA片段的reads數，即標記序列的reads數，根據公式，(標記序列的reads數)/(標記序列的分子數)＝(淋巴細胞的reads數)/(淋巴細胞的分子數)，獲得淋巴細胞的分子數，即淋巴細胞的數量。

10.一種免疫相關疾病致病細胞的檢測方法，包括利用權利要求9的方法檢測淋巴細胞的數量，并通過高通量測序技術檢測致病克隆在淋巴細胞中的準確比例，根據淋巴細胞的數量和致病克隆在淋巴細胞中的比例，計算免疫相關疾病的致病細胞數量。