[發(fā)明專(zhuān)利]一種活化部分凝血活酶時(shí)間檢測(cè)試劑及其檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610895644.0
• 申請(qǐng)日: 2016-10-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107942080A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊軍京
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京眾馳偉業(yè)科技發(fā)展有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/86
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/86
• 代理公司: 北京品源專(zhuān)利代理有限公司11332
• 代理人: 鞏克棟,侯桂麗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于臨床醫(yī)學(xué)檢測(cè)技術(shù)，具體涉及一種活化部分凝血活酶時(shí)間檢測(cè)試劑及其檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

凝血實(shí)驗(yàn)對(duì)臨床各科的疾病診斷具有重要的意義，除了對(duì)出血疾病的篩選與診斷外，還用于血栓前狀態(tài)的檢查；彌漫性血管內(nèi)凝血出血疾病(DIC)的實(shí)驗(yàn)診斷以及對(duì)各種抗凝治療者的用藥指導(dǎo)和預(yù)后估計(jì)等。目前臨床上常用的檢測(cè)出凝血機(jī)制的試驗(yàn)有凝血四項(xiàng)(含凝血酶原時(shí)間PT、活化部分凝血活酶時(shí)間APTT、凝血酶時(shí)間TT、纖維蛋白原FIB含量)測(cè)定。

血栓與止血不僅涉及基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)，且與多個(gè)臨床學(xué)科(包括血液科呼吸消化科心血管科神經(jīng)科婦產(chǎn)科普通外科)的疾病密切相關(guān)：1)所有手術(shù)前檢查：外科手術(shù)(普外、骨外、婦產(chǎn)、五官、心臟等手術(shù))檢查病人的出凝血機(jī)能，以免術(shù)中發(fā)生危險(xiǎn)；2)監(jiān)測(cè)抗凝及溶栓治療：如換瓣手術(shù)后、肝素治療、口服抗凝劑(華發(fā)令、香豆素等)減少臨床治療出血發(fā)生率；3)血栓前狀態(tài)監(jiān)測(cè)：心肌梗塞、靜脈血栓；4)彌漫性血管內(nèi)凝血；5)先天及后天性凝血因子缺乏；6)各類(lèi)肝臟疾病及纖維蛋白原缺乏所致的出血傾向；7)凝血酶原及纖維蛋白原缺乏所致的出血傾向；8)動(dòng)脈粥樣硬化；9)中醫(yī)活血化淤的診療研究。

人體內(nèi)存在著正常的止血、凝血和抗凝系統(tǒng)，此系統(tǒng)一直保持著動(dòng)態(tài)的生理平衡。若止凝血活性增強(qiáng)或抗凝血活性減弱，便會(huì)導(dǎo)致血栓前狀態(tài)或血栓形成；相反，會(huì)引起低凝狀態(tài)或出血傾向。活化部分凝血活酶時(shí)間是凝血系統(tǒng)的一個(gè)較為敏感的篩選試驗(yàn)。凝血酶原時(shí)間主要反映內(nèi)源性凝血途徑是否正常，也可用于肝素治療的監(jiān)控，它對(duì)凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ和激肽釋放原敏感。

活化部分凝血酶時(shí)間(APPT)作為血凝四項(xiàng)的重要指標(biāo)之一，是監(jiān)測(cè)普通抗凝劑肝素的首選指標(biāo)，是內(nèi)源性凝血系統(tǒng)過(guò)篩試驗(yàn)，并且是APCR篩選與確認(rèn)的首選手段。由于APTT操作簡(jiǎn)單、迅速、敏感性高、重現(xiàn)性好而得到廣泛的應(yīng)用，然而迄今為止，國(guó)內(nèi)APTT測(cè)定或試劑尚無(wú)標(biāo)準(zhǔn)化方案。與之有關(guān)的問(wèn)題如不同的APTT試劑對(duì)凝血因子、肝素、狼瘡抗凝因子敏感性相差甚大等。同時(shí)，由于不同實(shí)驗(yàn)室使用APTT質(zhì)量上的不同，使得同一個(gè)患者在不同的醫(yī)院測(cè)定的結(jié)果不一致，影響對(duì)疾病的正確、及時(shí)診斷。

CN 101226201B公開(kāi)了一種可用于測(cè)定血漿中活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)測(cè)定試劑，該試劑由下述的原料配置而成：試劑固體激活劑0.05～0.5g/l；磷酯20～200mg/l；二價(jià)金屬離子鹽0.1～10mmol/l；穩(wěn)定劑0.1-0.5g/l；聚乙二醇PEG0.1～10g/l；緩沖劑0.05～4.0g/l；復(fù)興劑2.0～5.0g/l；其余是水。該測(cè)定試劑的測(cè)定時(shí)間長(zhǎng)，穩(wěn)定性不佳。

因此，APTT試劑的質(zhì)量成為獲得準(zhǔn)確結(jié)果及提供臨床醫(yī)生準(zhǔn)備判斷的關(guān)鍵，同時(shí)，由于復(fù)溶后的試劑穩(wěn)定性差，增加浪費(fèi)，導(dǎo)致醫(yī)療單位成本增加，患者負(fù)擔(dān)加重。所以，研制一種安全、穩(wěn)定、可靠、準(zhǔn)確的液體|APTT，對(duì)于醫(yī)療機(jī)構(gòu)的使用及臨床結(jié)果的準(zhǔn)確判斷有著極為重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種活化部分凝血活酶時(shí)間檢測(cè)試劑及其檢測(cè)方法，所述檢測(cè)方法試劑簡(jiǎn)單，檢測(cè)試劑穩(wěn)定，而且反應(yīng)體系穩(wěn)定，影響因素少，且檢測(cè)精準(zhǔn)，操作簡(jiǎn)單，為臨床醫(yī)學(xué)上內(nèi)源性凝血因子缺乏和肝素治療，提供了安全、可靠、重復(fù)性好的體外診斷試劑。

第一方面，本發(fā)明提供了一種活化部分凝血活酶時(shí)間檢測(cè)試劑，所述檢測(cè)試劑包括新鮮兔腦浸液。

本發(fā)明中，所述新鮮兔腦浸液保證了兔腦復(fù)合磷脂中磷酯酰絲氨酸和磷脂酰膽堿的活性及最佳比例，而市售產(chǎn)品加入的都是兔腦粉或是其他兔腦制品，其在制備過(guò)程中加入了丙酮及四氯甲烷等物質(zhì)，除了對(duì)復(fù)合磷脂的活性有影響同時(shí)其殘留也對(duì)成品的品質(zhì)有影響。

優(yōu)選地，所述新鮮兔腦浸液按重量百分比計(jì)占所述檢測(cè)試劑的5-30％，例如可以是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％，優(yōu)選為10-15％，進(jìn)一步優(yōu)選為12％。

優(yōu)選地，所述新鮮兔腦浸液的制備方法包括如下步驟：將新鮮兔頭剝開(kāi)腦殼，去除表層物質(zhì)，稱(chēng)重研磨，加入生理鹽水后水浴靜置，離心取上清得到新鮮兔腦浸液。

優(yōu)選地，所述研磨后的兔腦與生理鹽水的體積比為1:(2-8)，例如可以是1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7或1:8，優(yōu)選為1:(4-6)，進(jìn)一步優(yōu)選為1:4。