[發明專利]一種EV71-VP1手足口病多肽疫苗及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201610892209.2
• 申請日: 2016-10-13
• 公開（公告）號: CN106377766B
• 公開（公告）日: 2020-01-07
• 發明（設計）人: 黃波;李青;顧勝利;湯正珍;韓允;李穎
• 申請（專利權）人: 遵義市第一人民醫院;重慶高圣生物醫藥有限責任公司
• 主分類號: A61K39/125
• 分類號: A61K39/125;A61P31/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種EV71-VP1手足口病多肽疫苗的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟（1），從手足口患者體內分離得到EV71病毒，并對其進行了全基因組測序分析，成功得到的EV71病毒VP1結構蛋白，將其氨基酸分成20組，每組15個氨基酸，加上下游的5個氨基酸，每組20個氨基酸的多肽，最后一組為12個氨基酸，直接合成多肽片段,片段序列如SEQID NO.1-20所示；

步驟（2），通過收集臨床具有代表性的手足口康復患兒的血清，采用人腸道病毒EV71型IgG ELISA試劑盒進行檢測血清抗體濃度，篩選出含EV71病毒抗體血清即目標一抗，進一步合成多肽包被ELISA板，加入目標一抗，多肽抗原與一抗免疫反應基礎上繼續加入兔抗人的二抗IgG，通過酶聯免疫吸附分析免疫反應，初步篩選出具有較高免疫效果的多肽；

步驟（3），為進一步驗證上述初步篩選的多肽是否在體內依然具有免疫效果，構建免疫小鼠模型，并對其進行病理切片HE染色法病理分析，結果表明多肽氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.2和SEQ ID NO .8對模型免疫小鼠的免疫效應均具有顯著意義，而多肽氨基酸序列如序列表 SEQ ID NO.4免疫效果不明顯，篩選出的 SEQ ID NO.2和SEQ ID NO .8所示多肽，即為多肽疫苗。

2.一種EV71-VP1手足口病多肽疫苗，其特征在于,所述多肽由權利要求1所述制備方法制得。

3.如權利要求2所述EV71-VP1手足口病多肽疫苗，其特征在于，步驟（2）中酶聯免疫吸附測定優選的具有免疫效果的多肽氨基酸序列如序列表中 SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.4和SEQ ID NO .8。

4.如權利要求2所述EV71-VP1手足口病多肽疫苗，其特征在于，步驟（3）中病理檢測進一步驗證最終優選的具有免疫效果的多肽氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.2和SEQ IDNO .8。

5.如權利要求4所述EV71-VP1手足口病多肽疫苗，其特征在于，步驟（3）中優選的多肽氨基酸序列SEQ ID NO.8對模型免疫小鼠的小腸、骨骼肌和大腦均具有較高的免疫效果。

6.如權利要求4所述EV71-VP1手足口病多肽疫苗，其特征在于，步驟（3）中優選的多肽氨基酸序列SEQ ID NO.2對模型免疫小鼠的骨骼肌具有較高的免疫效果。

7.權利要求2-6任意項所述EV71-VP1手足口病多肽疫苗在制備預防手足口病的藥物中的應用。