[發(fā)明專利]一種原花青素B2印跡整體柱的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610891099.8
• 申請(qǐng)日: 2016-10-12
• 公開（公告）號(hào): CN106345436B
• 公開（公告）日: 2018-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉照勝;賈曼;阿吉艾克拜爾·艾薩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所
• 主分類號(hào): B01J20/26
• 分類號(hào): B01J20/26;B01J20/28;B01J20/30;B01D15/22
• 代理公司: 烏魯木齊中科新興專利事務(wù)所65106
• 代理人: 張莉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種原花青素B2印跡整體柱的制備方法，該印跡聚合物對(duì)原花青素B2表現(xiàn)出良好的選擇性，可用于原花青素B2的分離純化。

背景技術(shù)

原花青素是一種具有重要生理活性的多酚化合物，植物化學(xué)家從植物中分離出一些無色的在有機(jī)酸存在和加熱情況下能產(chǎn)生紅色的花青素(cyanidin)，這樣一類多酚化合物統(tǒng)稱為原花青素，許多研究表明原花青素是清除自由基最強(qiáng)的一種抗氧化劑，它能防御80多種因自由基引起的疾病，其中包括心臟病，關(guān)節(jié)炎等。最簡單的原花青素是兒茶素，表兒茶素或者兒茶素和表兒茶素形成的二聚體。按照聚合程度通常將二-四聚體成為低聚體(procyanidolic oligomers,OPC),將五聚體以上的稱為高聚體(procyanidolic polymers,PPC).二聚體中因兩個(gè)單體的構(gòu)象或者鍵合位置的不同可有多種異構(gòu)體，其中最易分離鑒定的8種結(jié)構(gòu)形式分別命名為B1-B8，二聚體是分布最廣，研究的最多，也是最重要的一類原花青素。

研究表明，原花青素B2能夠有效清除自由基，明顯降低糖尿病患者的血糖以及促進(jìn)頭發(fā)生長等作用，在國家二類中藥新藥威麥寧膠囊中，原花青素B2是主要成分，并且是抗癌作用的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。但是目前原花青素的測定存在著一些問題。首先，雖然測定原花青素的方法細(xì)節(jié)各不相同，但基本上都是基于bate-smith法，而bate-smith法測定的結(jié)果是一個(gè)值，而不是百分比，因此將原花青素B2作為標(biāo)定原花青素含量的對(duì)照品是比較科學(xué)的。由于原花青素B2在植物中含量較少，若采用一般傳統(tǒng)的方法，費(fèi)事費(fèi)力，若采用制備液相則儀器昂貴，不能普遍使用，因此采用一種價(jià)位廉價(jià)又具有專一的方法得到原花青素B2方法顯得尤其重要。

分子印跡是一種基于“鎖鑰原理”，通過模仿生物細(xì)胞中酶與底物間的相互作用，人工合成的具有特異選擇性的新興技術(shù)材料。分子印跡的方法十分簡單，并且易于操作，工作中需要的原料有：功能單體，模板，溶劑以及交聯(lián)劑等。聚合反應(yīng)是在體系中引入模板分子后進(jìn)行的，在這些過程中，功能單體是以有序的方式和模板分子組合起來的，與此同時(shí)，其功能基團(tuán)也被安置于有著期望尺寸腔體內(nèi)的某些期望的位置上。這里既不需要有復(fù)雜的有機(jī)合成，也不需要有復(fù)雜的分子設(shè)計(jì)。基于這種原理，分子印跡被廣泛應(yīng)用于制作固相萃取填料，用以對(duì)復(fù)雜的天然產(chǎn)物中活性分子的純化分離。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是，提供一種原花青素B2印跡整體柱的制備方法，該方法以少量的原花青素B2為模板分子，同時(shí)加入聚苯乙烯、聚乙二醇這兩種擁擠試劑，以四氫呋喃溶液做溶劑，以甲苯做致孔劑，再加入功能單體、交聯(lián)劑或引發(fā)劑，然后超聲溶解除去溶解氧并引發(fā)反應(yīng)，最后得到具有選擇性的原花青素B2分子印跡整體柱。本發(fā)明所述方法模板消耗量少，大大地降低了原花青素B2的印跡成本。在不銹鋼柱管(100mm×4.6mm)中成功合成了原花青素B2印跡整體柱，以及空白對(duì)照柱并進(jìn)行色譜性能優(yōu)化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，印跡因子最高可達(dá)5.13。該方法制備簡單，且高分子聚合物耐用性好，為原花青素B2的分離純化提供了一種節(jié)約成本的方法。

本發(fā)明所述的一種原花青素B2印跡整體柱的制備方法，按下列步驟進(jìn)行：

a、按物質(zhì)的量比為1:32的原花青素B2和丙烯酰胺溶于濃度為40mg/mL含聚苯乙烯的四氫呋喃溶液，然后加入30-50mg聚乙二醇和20-40mg的自由基引發(fā)劑偶氮二異丁腈，最后再加入565μL二甲基丙烯酸乙二醇酯和230μL甲苯，超聲10分鐘，除去溶解在其中的氧氣，待溶液澄清后，將溶液轉(zhuǎn)移至不銹鋼管中，快速封住不銹鋼管的兩端，在溫度55℃恒溫水浴中反應(yīng)24小時(shí)；

b、將合成的不銹鋼柱從水浴鍋中取出，裝上柱頭，連接在高壓輸液泵上，分別以200mL四氫呋喃，體積比9:1的甲醇-乙酸200mL的混合液以沖洗整體柱，流速為1.0mL/min，沖洗完畢后即可得到原花青素B2印跡整體柱。

步驟a中聚乙二醇的平均相對(duì)分子質(zhì)量為6,000，聚苯乙烯的平均相對(duì)分子質(zhì)量為350,000。

本發(fā)明所述的一種原花青素B2印跡整體柱的制備方法，該方法通過整體柱的色譜性能評(píng)價(jià)，測得相比于空白對(duì)照柱，原花青素B2印跡整體柱對(duì)原花青素B2的保留性能較強(qiáng)；因此，本發(fā)明可用于原花青素B2的分離純化。

附圖說明

圖1為本發(fā)明原花青素B2在原花青素B2印跡整體柱及其空白對(duì)照柱上的不同色譜行為，其中a為空白對(duì)照柱子，b為原花青素B2印跡整體柱；