[發(fā)明專利]一種甜瓜黃斑病毒的免疫檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610885141.5
• 申請(qǐng)日: 2016-10-11
• 公開（公告）號(hào): CN107918012A
• 公開（公告）日: 2018-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曾蓉;戴富明;徐麗慧;高士剛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N33/535
• 分類號(hào): G01N33/535;G01N33/569
• 代理公司: 上海開祺知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司31114
• 代理人: 費(fèi)開逵,崔兆慧

1.一種甜瓜黃斑病毒的免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括：含甜瓜黃斑病毒的多克隆抗體和酶標(biāo)二抗；

所述含甜瓜黃斑病毒的多克隆抗體是利用原核表達(dá)的甜瓜黃斑病毒衣殼蛋白為免疫原制備得到的抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甜瓜黃斑病毒的免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述含甜瓜黃斑病毒的多克隆抗體的制備方法為：通過(guò)原核表達(dá)的方法表達(dá)出甜瓜黃斑病毒的衣殼蛋白；再經(jīng)電泳純化后，耳靜脈免疫家兔；免疫3-5次后心臟取血，收集上層血清，并純化即得。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的甜瓜黃斑病毒的免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述免疫檢測(cè)試劑盒還包括陽(yáng)性質(zhì)控、濾膜、樣品研磨液、洗膜液、封閉液和顯色液，所述濾膜為尼龍膜或硝酸纖維素膜。

4.如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述免疫檢測(cè)試劑盒在甜瓜黃斑病毒檢測(cè)中的應(yīng)用。

5.如權(quán)利要求1-3所述甜瓜黃斑病毒的免疫檢測(cè)試劑盒的使用方法，其包括如下步驟：

1)將待測(cè)樣品與樣品研磨液混合，將得到的混合液滴在濾膜上，室溫風(fēng)干；同時(shí)，設(shè)置陽(yáng)性和陰性對(duì)照組；

2)將干燥后的濾膜浸入封閉液中，室溫放置0.5～2小時(shí)；

3)用封閉液稀釋包含甜瓜黃斑病毒的多克隆抗體，抗體稀釋比例為：1:2000～1:20000，體積比；將步驟2)得到的濾膜浸入稀釋后的多克隆抗體中，室溫放置1～2小時(shí)，再用洗膜液洗膜5～10分鐘；

4)用封閉液稀釋酶標(biāo)二抗，酶標(biāo)二抗稀釋比例為1:4000～1:20000，體積比；將步驟3)得到的濾膜浸入稀釋后的酶標(biāo)二抗中，室溫放置0.5～1小時(shí)，再用洗膜液洗膜5～10分鐘；

5)加入顯色液，黑暗條件下室溫放置至顯色，觀察顯色結(jié)果：顯示為紫色的，待測(cè)樣品攜帶MYSV病毒；不顯色或只有葉片本色的，待測(cè)樣品不攜帶MYSV病毒。