[發明專利]HPV高危毒株基因分型檢測的探針組合、試劑盒以及方法

有效

• 申請號: 201610877670.0
• 申請日: 2016-09-30
• 公開（公告）號: CN106282413B
• 公開（公告）日: 2019-11-22
• 發明（設計）人: 廖瑋;莫亞勤;林曉燕;張晨光
• 申請（專利權）人: 廣州易活生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6834;C12N15/11
• 代理公司: 11371 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 李進<國際申請>=<國際公布>=<進入國

本發明公開了HPV高危毒株基因分型檢測的探針組合、試劑盒以及方法，涉及基因檢測技術領域，其包括多個探針對，每個探針對包括用于結合目標序列的捕獲探針和與捕獲探針對應的且可結合目標序列的檢測探針，檢測探針的3’端或5’端標記有用于結合催化酶的親和物。該探針組合能夠對待測樣本中的病毒進行基因型檢測，具有較強的特異性、較高的靈敏度以及較低的假陽性率，且檢出結果準確可靠。

技術領域

本發明涉及基因檢測技術領域，具體而言，涉及HPV高危毒株基因分型檢測的探針組合、試劑盒以及方法。

背景技術

宮頸癌是女性生殖道最常見的惡性腫瘤之一，已有研究表明，高危型人乳頭瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)持續感染及多重感染是導致宮頸癌變的重要原因之一，全球范圍的研究結果顯示，在99.7％的宮頸癌患者體內檢測到高危型HPV DNA的存在。目前已經發現的HPV有200多種型別，主要包括低危型和高危型兩大類。不同型別與不同疾病的相關性也不一樣，低危型HPV感染可能會引起生殖道濕疣病變，高危型HPV感染則與宮頸癌、陰道癌相關。目前還缺乏針對HPV公認的有效治療手段，因此宮頸HPV早發現、早預防是阻斷癌變的關鍵。

多年來，國際上通用的宮頸上皮內瘤變及宮頸癌的診斷主要遵循“三階梯式”診斷程序，即宮頸細胞學、陰道鏡及組織病理學檢查。由于HPV不能體外培養，HPV檢測方法主要基于HPV DNA的分子分型。HPV核酸檢測技術主要包括雜交捕獲法，PCR-熒光探針法、轉錄介導的核酸擴增技術以及PCR-雜交法等。

宮頸癌的早期篩查方式是采用巴氏涂片以及改進后的TCT技術，這些方法只能從細胞學病變的角度來評估宮頸癌的發病情況，也就是說需要等到遭受病毒感染的細胞開始出現明顯變化時才可以檢測出來，特異性和靈敏度均不夠理想。隨著對HPV感染導致宮頸癌的認識加深以及分子診斷技術的發展，HPV基因檢測作為宮頸癌的一種篩查手段得到了更廣泛的應用。目前HPV分型檢測技術主要基于聚合酶鏈反應，如熒光定量、反向斑點雜交和基因芯片技術等，這些技術表現出高靈敏度、高特異性，可以進行多重感染檢測等優點，但這些技術對實驗條件和檢驗人員素質要求高，檢測費用也較高，不太適用于大量的臨床檢測和大規模的流行病學篩查。第二代基因雜交捕獲技術檢測采用美國Digene公司的HC2技術試劑盒，HC2是一種應用微孔板化學發光進行信號放大的核酸雜交檢測方法，被公認為評價HPV檢測新技術的金標準。然而，HC2檢測方法價格昂貴，且其方法操作繁瑣，操作過程中容易交叉污染而出現假陽性。

發明內容

本發明的第一目的在于提供HPV高危毒株基因分型檢測的探針組合，該探針組合能夠對待測樣本中的HPV高危型病毒進行基因型檢測，具有較強的特異性、較高的靈敏度以及較低的假陽性率，且檢出結果準確可靠。

本發明的第二目的在于提供HPV高危毒株基因分型檢測的試劑盒，該試劑盒能夠對待測樣本中的HPV高危型病毒進行基因型檢測，其具有較強的特異性和較高的靈敏度，且檢出結果準確可靠、假陽性率低、操作簡單方便。

本發明的第三目的在于提供HPV高危毒株基因分型檢測的方法,該方法能夠對待測樣本中的HPV高危型病毒進行基因型檢測，具有較強的特異性和較高的靈敏度，且檢出結果準確可靠，檢測方法簡單易操作。

本發明解決其技術問題是采用以下技術方案來實現的。

一種HPV高危毒株基因分型檢測的探針組合，

其包括多個探針對，每個探針對包括用于結合目標序列的捕獲探針(CaptureProbe，CP)和與捕獲探針相對應的且可結合目標序列的檢測探針(Detector Probe，DP)，每個探針對的檢測探針的3’端或5’端標記有用于結合催化酶的親和物，催化酶用于催化底物產生化學反應形成電子流，多個探針對包括：第1探針對、第2探針對、選自第3～11探針對中的至少一種；