[發明專利]一種用于從細胞中提取核酸的方法和試劑在審
| 申請號： | 201610877375.5 | 申請日： | 2016-10-09 |
| 公開（公告）號： | CN107916262A | 公開（公告）日： | 2018-04-17 |
| 發明（設計）人： | 袁新旺;劉曉雷;管延斌 | 申請（專利權）人： | 上海怡澤生物科技有限公司;蘇州英澤生物醫藥科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 201318 上海市浦東新區周*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 細胞 提取 核酸 方法 試劑 | ||
1.一種用于從培養的細胞中提取核酸的方法和試劑，其特征在于，核酸提取方法包含如下步驟：獲取細胞；用核酸提取試劑裂解細胞；加熱失活RNA酶；
所述的核酸提取試劑配方為：
表面活性劑0.01%~5%；
RNA酶抑制劑0~10U/μL；
還原劑1mmol/L~200mmol/L；
螯合劑0.01mmol/L~200mmol/L；
緩沖成分0.1mmol/L~500mmol/L，pH在5~10之間。
2.根據權利要求1所述的一種用于從培養的細胞中提取核酸的方法和試劑，其特征在于，所述的核酸提取試劑含有一種或幾種表面活性劑；表面活性劑種類可以為非離子表面活性劑，陰離子表面活性劑，陽離子表面活性劑，或兩性離子表面活性劑。
3.根據權利要求1所述的一種用于從培養的細胞中提取核酸的方法和試劑，其特征在于，所述的核酸提取試劑含有RNA酶抑制劑；所述的RNA酶抑制劑可以是人胎盤RNA酶抑制劑或鼠源RNA酶抑制劑。
4.根據權利要求1所述的一種用于從培養的細胞中提取核酸的方法和試劑，其特征在于，所述的核酸提取試劑含有還原劑；所述的還原劑可以是β-巰基乙醇（BME）或二硫蘇糖醇（DTT）等。
5.根據權利要求1所述的一種用于從培養的細胞中提取核酸的方法和試劑，其特征在于，所述的核酸提取試劑含有螯合劑；所述的螯合劑可以是EDTA或EGTA等。
6.根據權利要求1所述的一種用于從培養的細胞中提取核酸的方法和試劑，其特征在于，所述的核酸提取試劑含有緩沖成分；所述的緩沖成分可以是Tris-HCl，HEPES等，pH在5~10之間。
7.根據權利要求1所述的一種用于從培養的細胞中提取核酸的方法和試劑，其特征在于，所述的培養的細胞為原核細胞或真核細胞，生長狀態可以是懸浮或貼壁。
8.根據權利要求1所述的一種用于從培養的細胞中提取核酸的方法和試劑，其特征在于，用核酸提取試劑裂解細胞時，細胞數量與核酸提取試劑體積的比例在0.01~20000細胞/μL核酸提取試劑范圍內。
9.根據權利要求1所述的一種用于從培養的細胞中提取核酸的方法和試劑，其特征在于，從培養的細胞中提取出的核酸可用于基因表達水平檢測、基因克隆或測序等工作。
10.根據權利要求1所述的一種用于從培養的細胞中提取核酸的方法和試劑，其特征在于，提取出的核酸可直接用于基因表達水平檢測、基因克隆或測序等操作，也可保存于-20℃或-80℃以待后續的實驗使用。
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