[發(fā)明專利]半滑舌鰨性逆轉(zhuǎn)遺傳控制位點(diǎn)的篩選方法、試劑盒及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610875794.5
• 申請(qǐng)日: 2016-09-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106591429B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-05-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李恒德;蔣麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;A01K61/10
• 代理公司: 北京康信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11240
• 代理人: 趙囡囡;張永明

本發(fā)明提供了一種半滑舌鰨性逆轉(zhuǎn)遺傳控制位點(diǎn)的篩選方法、試劑盒及應(yīng)用。該篩選方法包括：對(duì)半滑舌鰨遺傳雌魚進(jìn)行全基因組分子標(biāo)記，獲得多個(gè)SNP位點(diǎn)；將遺傳雌魚是否性逆轉(zhuǎn)作為性狀，對(duì)多個(gè)SNP位點(diǎn)進(jìn)行全基因組關(guān)聯(lián)分析，獲得半滑舌鰨性逆轉(zhuǎn)遺傳控制位點(diǎn)。通過(guò)從控制雌魚性逆轉(zhuǎn)的遺傳控制角度，利用遺傳雌魚獨(dú)有的SNP位點(diǎn)與性逆轉(zhuǎn)的相關(guān)性進(jìn)行全基因組分析，從而發(fā)現(xiàn)了控制遺傳雌魚發(fā)生性逆轉(zhuǎn)的分子開(kāi)關(guān)，即Z染色體上第6676874位核苷酸。利用該位點(diǎn)控制半滑舌鰨的雌雄魚的交配方式，使人工養(yǎng)殖的半滑舌鰨后代中不進(jìn)行性逆轉(zhuǎn)的雌魚比例提高，進(jìn)而提高養(yǎng)殖生產(chǎn)效益。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域，具體而言，涉及一種半滑舌鰨性逆轉(zhuǎn)遺傳控制位點(diǎn)的篩選方法、試劑盒及應(yīng)用。

背景技術(shù)

半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis)是一種暖溫性近海大型底層魚類，終年生活棲息在中國(guó)近海海區(qū)，具廣溫、廣鹽和適應(yīng)多變的環(huán)境條件的特點(diǎn)，適溫范圍3.5～32℃，最適水溫14～24℃，適鹽范圍14～33‰。半滑舌鰨自然資源量少，味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富。半滑舌鰨生長(zhǎng)速度快、個(gè)體大，經(jīng)過(guò)科技人員多年的努力，半滑舌鰨人工育苗技術(shù)已經(jīng)非常成熟并應(yīng)用于生產(chǎn)。

半滑舌典型的生物學(xué)特點(diǎn)是成體雌魚和雄魚差異很大，雌魚體尺和體重約為雄魚的2～4倍，所以養(yǎng)殖戶非常青睞雌魚。但近年來(lái)，全國(guó)各地的苗種場(chǎng)和養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)現(xiàn)，雌魚比例越來(lái)越少，目前的比例大致為20％左右，嚴(yán)重制約了半滑舌鰨的生產(chǎn)效益。半滑舌鰨雌魚比例較低的原因是部分雌魚在早期發(fā)育階段，大約在30～90日齡這個(gè)時(shí)期會(huì)發(fā)生逆轉(zhuǎn)，遺傳雌魚(即從染色體角度看是ZW型)的舌鰨卵巢退化，精巢發(fā)育，發(fā)育為生理雄魚(即偽雄魚，從體型上看是雄魚，但染色體是ZW型)，因而成熟時(shí)體型較小。

很多研究者嘗試采用雌核發(fā)育或染色體加倍等方式生產(chǎn)全雌苗種，但效果均不如人意。其中最主要的原因是，由于半滑舌鰨性別決定屬于ZW型，雌性為ZW型，雄性為ZZ型。要想生產(chǎn)全雌苗種，必須首先生產(chǎn)出WW型的超雌魚。根據(jù)舌鰨基因組和其他ZW型物種的基因組研究表明，W染色體上基因數(shù)目很少，缺少很多個(gè)體生長(zhǎng)發(fā)育所必需的基因。因此，目前的方法還無(wú)法生產(chǎn)出WW的超雌魚。據(jù)報(bào)道WW型超雌魚在肌節(jié)期就無(wú)法進(jìn)一步發(fā)育而死亡。

既然無(wú)法做到生產(chǎn)全雌苗種，通過(guò)一定的手段提高雌魚的比例也可以有效提高半滑舌鰨的生產(chǎn)效益。目前利用半滑舌鰨性別差異來(lái)改善養(yǎng)殖生產(chǎn)效益的手段僅限于通過(guò)分子標(biāo)記來(lái)判斷雌魚和雄魚，但沒(méi)有辦法提高雌魚的比例，因而對(duì)半滑舌鰨生產(chǎn)效益的改善作用有限。而且，一直以來(lái)，相關(guān)研究人員均認(rèn)為半滑舌鰨的雌性比例與溫度有關(guān)，隨著溫度的升高，雌性比例呈下降趨勢(shì)。但在實(shí)際生產(chǎn)中，水溫的控制技術(shù)非常成熟，但仍然難以抵擋雌性逆轉(zhuǎn)為雄性這一趨勢(shì)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的在于提供一種半滑舌鰨性逆轉(zhuǎn)遺傳控制位點(diǎn)的篩選方法、試劑盒及應(yīng)用，以解決現(xiàn)有技術(shù)中養(yǎng)殖群體中雌魚比例降低而影響生產(chǎn)效益的問(wèn)題。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種半滑舌鰨性逆轉(zhuǎn)遺傳控制位點(diǎn)的篩選方法，該篩選方法包括：對(duì)半滑舌鰨遺傳雌魚進(jìn)行全基因組分子標(biāo)記測(cè)定，獲得多個(gè)SNP位點(diǎn)；將遺傳雌魚是否性逆轉(zhuǎn)作為性狀，對(duì)多個(gè)SNP位點(diǎn)進(jìn)行全基因組關(guān)聯(lián)分析，獲得半滑舌鰨性逆轉(zhuǎn)遺傳控制位點(diǎn)。

進(jìn)一步地，全基因組關(guān)聯(lián)分析步驟中包括控制遺傳背景影響的步驟，優(yōu)選控制遺傳背景影響的步驟采用線性混合模型進(jìn)行控制。

進(jìn)一步地，采用2b-RAD方法對(duì)半滑舌鰨遺傳雌魚進(jìn)行全基因組分子標(biāo)記測(cè)定，獲得多個(gè)SNP位點(diǎn)；優(yōu)選地，在對(duì)半滑舌鰨遺傳雌魚進(jìn)行全基因組分子標(biāo)記測(cè)定之前，篩選方法還包括確定遺傳雌魚的步驟。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種半滑舌鰨性逆轉(zhuǎn)遺傳控制位點(diǎn)在半滑舌鰨人工養(yǎng)殖中的應(yīng)用，半滑舌鰨性逆轉(zhuǎn)遺傳控制位點(diǎn)為Z染色體上第6676874位核苷酸。