[發明專利]一種自供能miRNA生物傳感器的制備方法

有效

• 申請號: 201610871097.2
• 申請日: 2016-09-30
• 公開（公告）號: CN106814118B
• 公開（公告）日: 2019-02-15
• 發明（設計）人: 蓋盼盼;侯婷;李峰
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: G01N27/403
• 分類號: G01N27/403
• 代理公司: 青島發思特專利商標代理有限公司 37212
• 代理人: 鞏同海

1.一種基于EBFC的自供能miRNA生物傳感器，其特征在于，所述生物傳感器為酶生物燃料電池，包括陽極、陰極、電子受體儲存器和電解液；所述陽極為CNT/AuNPs/GOx生物陽極，

所述電子受體儲存器為[Fe(CN)₆]^3-@MSN@ssDNA，

所述電解液為含5 mM 葡萄糖pH 7.4的100 mM Tris-HCl緩沖體系；

所述電子受體儲存器的制備方法包括如下步驟：

步驟（1）：濃度為1.5~3.0mg/mL的CTAB水溶液中，加入500~1000μL、2.0M的NaOH溶液，在80℃下劇烈攪拌10~20min，隨后，將0.5~2mL的TEOS加入到上述溶液中緩慢攪拌1~3h直至白色沉淀產生；洗滌、回流、去除表面活性劑模板，制得MSN；

步驟（2）：取一定量的步驟（1）制得的MSN，加入1~2倍于MSN質量的1%的PDDA溶液，超聲溶解，隨后，將上述混合物在10000~15000rpm下離心10~20min并清洗多次，干燥后得到PDDA修飾的MSN；

步驟（3）：取一定量的步驟（2）制得的PDDA修飾的MSN與一定量及濃度的[Fe(CN)₆]^3-混合，室溫下緩慢攪拌過夜；隨后，將10pM~100nM的ssDNA加入到上述溶液中，并在室溫下緩慢攪拌孵育2~6h后離心洗滌至少三次，去除未被封裝在孔內的[Fe(CN)₆]^3-，得到[Fe(CN)₆]^3-@MSN@ssDNA。

2.根據權利要求1所述的基于EBFC的自供能miRNA生物傳感器，其特征在于，所述步驟（3）中離心洗滌的轉速為2000~5000rpm，時間為1~5min。

3.根據權利要求1所述的基于EBFC的自供能miRNA生物傳感器，其特征在于，所述CNT/AuNPs/GOx生物陽極的制備方法包括如下步驟：

步驟（1）：取一定量CNT分散在1~2倍于CNT質量的1%的PDDA的鹽溶液中，超聲0.5~2h得到帶正電的均勻懸濁液，離心去除剩余的PDDA，得到CNT/PDDA；

步驟（2）：取一定量的步驟（1）制得的CNT/PDDA與1.0~5.0mL、10~100nM的AuNPs混合，在室溫下緩慢攪拌過夜，離心去除過量的AuNPs，得到CNT/AuNPs；

步驟（3）：將20~50μL步驟（2）制得的CNT/AuNPs滴涂在ITO電極表面，37℃下干燥2~4h后，將其浸泡在1~10mg/mL EDC和1~10mg/mL NHS的混合溶液中0.5~1h，二次水沖掉電極表面多余的EDC和NHS；

步驟（4）：將步驟（3）制得的活化的電極浸泡在500~1000μL、10~50mg/mL的GOx溶液中12~24h，二次水沖洗后，置于4℃下備用。

4.根據權利要求3所述的基于EBFC的自供能miRNA生物傳感器，其特征在于，所述步驟（1）中離心的轉速為10000~15000rpm，時間為10~20min。

5.根據權利要求3所述的基于EBFC的自供能miRNA生物傳感器，其特征在于，所述步驟（2）中離心的轉速為8000~10000rpm，時間為10~20min。

6.一種如權利要求1-5任意一項所述的基于EBFC的自供能miRNA生物傳感器的應用，其特征在于，將其用于檢測miRNA。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述檢測方法包括如下步驟：

步驟（1）：不引入目標miRNA，將一定量的[Fe(CN)₆]^3-@MSN@ssDNA加入到電解液中，測量電池的E^OCV，記為E₀^OCV；

步驟（2）：引入目標miRNA，將不同濃度的目標miRNA與一定量的[Fe(CN)₆]^3-@MSN@ssDNA在37℃下孵育1~6h，隨后將上述混合物加入到電解液中，再次測量電池的E^OCV。