[發明專利]一種具有抗氧化活性的蛋白肽及其制備方法

有效

• 申請號: 201610867457.1
• 申請日: 2016-09-29
• 公開（公告）號: CN106434804B
• 公開（公告）日: 2018-01-12
• 發明（設計）人: 張恒;羅永康
• 申請（專利權）人: 國肽生物科技（北京）有限公司
• 主分類號: C07K1/12
• 分類號: C07K1/12;C07K1/34;C07K1/16;C12P21/06;C07K7/06;A23L33/18;A61K47/42;A61K8/64;A61Q19/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明涉及水產食品加工技術領域，具體地涉及一種具有抗氧化活性的蛋白肽及其制備方法。

背景技術

蛋白質經過酶解得到多肽，使其蛋白質的結構發生改變，疏水區的活性官能基團暴露，隨著肽鍵的裂解，小分子蛋白肽和氨基酸增加，從而可以提供質子或電子源，保持較高的氧化還原電位，使其具有清除活性自由基的能力。氧化對需氧生物特別是脊椎動物和人類是一個重要的代謝過程，但是它卻導致了自由基的形成。活性氧自由基(ROS)被認為能引起氧化應激。在食品體系中，脂類或蛋白質可能會受到ROS的攻擊經歷氧化過程，從而導致食品產生不愉快味道，顏色發暗，同時也可能產生潛在的毒性終產物。抗氧化多肽的應用能防止食品成分由于捐獻電子給活性氧自由基以及中和活性氧自由基的負面作用而變質。抗氧化肽在醫學、化妝品、生物、食品領域有廣泛的應用價值。

化學合成抗氧化肽不同程度上損傷人體的肝臟、腎臟等器官，部分國家和地區已經明確限量或禁止使用。因此，研發高效、安全的天然抗氧化劑成為熱點。食用級抗氧化肽的安全性要求更高，抗氧化性較其他體內抗氧化生物分子更為顯著，可以穩定脂質或含脂質產品。天然的抗氧化多肽因分子量小、易吸收、活性強等特點。目前天然抗氧化肽主要是通過酶解大豆蛋白、奶酪、乳清蛋白、動物膠、面筋等各種食物蛋白獲得。最近幾年發展到海洋產品如海藻、蝦皮、兩棲動物裸露皮膚分泌物、真菌等。

有關天然抗氧化活性肽的制備方法，現有技術的不足在于大多數蛋白肽酶解過程中通過添加酸或堿調節pH，明顯地影響產品的風味，同時產品的灰分較高。

目前還沒有以魚肉為原料制備抗氧化肽的報道。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的是在于提供一種具有抗氧化活性的蛋白肽。

本發明的另一目的在于提供上述蛋白肽的制備方法。

本發明的再一個目的在于提供上述蛋白肽的應用。

為了實現上述技術目的，本發明提供了一種具有抗氧化活性的蛋白肽及其制備方法，包括以下步驟:

(1)超聲處理去脂的魚肉漿液；

(2)加入復合蛋白酶進行酶解，酶解過程無需添加酸或堿調節pH值；

(3)對酶解液離心并取上清液進行超濾；

(4)濾液過柱層析分離，收集洗脫峰，洗脫液通過反向高效液相色譜進行分離即得。

可選的，所述魚肉為淡水魚肉或海水魚肉。在本發明的實施例中選用鳙魚和鱈魚。

在本發明的一個實施例中，步驟(1)所述去脂的魚肉漿液通過以下方法制備得到：洗凈魚肉，用打漿機將魚肉打成漿，得魚肉漿；然后向魚肉漿中加入0.8-2.0倍魚肉重量的水，在85-95℃下水浴10-15min，再用分散均質機在8000-10000rpm下勻漿1-3min，得魚肉漿液；通過6000-8000g離心10-15min，去上層脂肪，得到去脂的魚肉漿液。本領域技術人員應當理解，去脂的魚肉漿液的制備方法包括但不限于上述方法。

步驟(1)超聲處理方法為將去脂的魚肉漿液溫度調至50-65℃，30-45kH的超聲頻率處理15-25min。

本發明通過大量實驗發現，魚肉漿液溫度調至50-65℃進行超聲處理，效果最好，能夠較好地改變魚肉蛋白的組織結構，使下面酶解步驟在較短酶解時間和較小的用酶量就能夠獲得優質的蛋白肽。

步驟(2)酶解加入的復合蛋白酶為堿性蛋白酶、風味蛋白酶和菠蘿蛋白酶，三者質量比為(2-3):(1-2):(1-2)，且加入的復合蛋白酶總質量與魚肉質量比為1：300-500。

優選地，所述堿性蛋白酶為Alcalase 2.4L堿性蛋白酶。

步驟(2)中酶解條件為55-65℃酶解2-5h。

步驟(2)酶解后將酶解液在95-100℃下保溫3-5min，冷卻至室溫。

步驟(3)離心條件為5000-7000g 10-15min；采用2000D的超濾膜進行超濾。

在本發明的一個實施例中，是利用孔徑為2000道爾頓的陶瓷膜對步驟(2)所得的上清液進行超濾，收集濾液，再經過Sephadex G-25凝膠分離，洗脫液為去離子水，流速為0.8mL/min，洗脫峰在280nm下進行檢測，收集第1個洗脫峰；再用RP-HPLC反相高效液相色譜進行1次分離，反相HPLC的分離條件是以5-90％乙腈溶液(0-5min乙腈溶液為5％，5-40min乙腈溶液從5％到40％，40-50min乙腈溶液從40％到90％)作為洗脫液，流速為5-8mL/min，得到含抗氧化活性肽的溶液。