[發明專利]PDGFRA基因突變檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201610866586.9
• 申請日: 2016-09-28
• 公開（公告）號: CN106636333A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 鄭焱;陳俊飛;陳佩璇;徐鋒;謝龍旭
• 申請（專利權）人: 廣東凱普生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種試劑盒，具體涉及一種腫瘤相關基因PDGFRA基因突變檢測試劑盒。

背景技術

胃腸道間質瘤（GIST）是消化道最常見的間葉源性腫瘤。PDGFRA基因編碼的蛋白質是血小板衍生生長因子受體A(PDGFRA)，為一種單鏈跨膜糖蛋白，與C-KIT同屬III型酪氨酸蛋白激酶家族，且結構相似，兩者的氨基酸序列有很高的同源性。PDGFRA與配體PDGF結合后形成受體配體復合物并活化PDGFRA，從而啟動磷脂酰肌醇、cAMP及多種蛋白質的磷酸化通路，通過各種信號轉導通路將有絲分裂等信號傳遞入細胞核，誘導相應基因表達，促進DNA合成，細胞分裂和增殖。當受體或配體發生異常突變，可導致惡性腫瘤。研究發現，PDGFRA基因D842V突變是導致GIST患者對格列衛產生原發耐藥性的原因。PDGFRA突變與c-kit基因突變是相互獨立的。因此，檢測腫瘤患者PDGFRA基因突變的情況可用于判斷格列衛(Imatinib /Glivec/Gleevec)治療是否有效。

PDGFRA基因突變的檢測主要有Sanger測序法、ARMS、RT-PCR等。其中RT-PCR技術采用等位基因特異性擴增法對樣本的基因突變進行區分，該方法成本較低，但檢測率較高，容易出現假陰性結果；ARMS技術是目前國內應用最為廣泛的技術，但只能檢測已知的位點，且要將樣本分成多個管進行實驗才能實現分型，對樣本量要求高；而Sanger測序法是DNA序列分析的經典方法，最直接的、可檢測已知和未知突變的一種方法。由于該方法可直接讀取DNA的序列，因此被認為是基因分型的金標準，其主要優點是測序長度較長，可發現新的變異位點，包括一些新的少見的突變形式及突變的確切類型，如點突變、片段缺失。所以探索一種可以采用Sanger測序法檢測PDGFRA基因的技術具有重要的臨床意義。

發明內容

本發明的目的是為了解決上述問題，提供一種PDGFRA基因突變檢測試劑盒，可直接利用含人體某組織部位的石蠟包埋樣本通過Sanger測序法檢測出樣本中PDGFRA基因主要突變位點型別，檢測位點包括PDGFRA基因12和18兩個外顯子的主要突變位點，包括但不限于12號外顯子上c. 1682T>A, p. V561D突變位點；18號外顯子上c. 2525A>T, p. D842V突變位點。

本發明的PDGFRA基因突變檢測試劑盒具體包括：

（1）用于擴增樣本中PDGFRA基因Exon12和18兩個外顯子的特異性引物，具體序列如下:

（2）用于測序PCR的測序引物，分別用于對PDGFRA基因Exon12和18兩個外顯子進行測序分析，具體序列如下：

外顯子名稱序列號Reverse 5’-3’12SEQ-PD12SEQ ID No.5GCAAGGGAAAAGGGAGTCTT18SEQ-PD18SEQ ID No.6ACCATGGATCAGCCAGTCTT