[發(fā)明專利]一種具有ACE抑制和抗氧化功能的甲魚蛋白肽及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610866528.6
• 申請(qǐng)日: 2016-09-29
• 公開（公告）號(hào): CN106632642B
• 公開（公告）日: 2018-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張恒;羅永康
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 安徽國(guó)肽生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/46
• 分類號(hào): C07K14/46;C12P21/06;C07K1/34;C07K1/16;A61K38/17;A61P9/12;A61P39/06;A23L33/18
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11002
• 代理人: 王文君

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及水產(chǎn)食品加工技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及一種具有ACE抑制和抗氧化功能的甲魚蛋白肽及其制備方法。

背景技術(shù)

高血壓是對(duì)人類健康危害極大的一種疾病，潛伏期長(zhǎng)。高血壓的早期階段，一般沒有明顯不適癥，直至發(fā)生臨床跡象心臟病發(fā)作、腦血管破裂而導(dǎo)致死亡。

血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(Angiotensin I converting enzyme，ACE)為腎素-血管緊張素系統(tǒng)的關(guān)鍵酶。血管緊張素原在腎素的作用下轉(zhuǎn)化為血管緊張素I，血管緊張素I在ACE的作用下轉(zhuǎn)化為血管緊張素II，刺激血管收縮，造成血壓上升。抑制ACE的活性對(duì)降低血壓有著積極的作用，因而開發(fā)有效的ACE抑制劑引起人們的極大關(guān)注。雖然來(lái)源于食物的ACE抑制肽比人工合成的ACE抑制劑作用弱，但是它有其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，不會(huì)產(chǎn)生降壓過(guò)度的問(wèn)題，安全性高，無(wú)副作用，除降壓功能外，往往同時(shí)具有免疫促進(jìn)、易消化吸收等功能。由于藥物療法存在副作用，天然食物中的降血壓功能因子的開發(fā)利用將成為今后高血壓非藥物治療的重要部分。

現(xiàn)有技術(shù)中關(guān)于ACE抑制肽開發(fā)的報(bào)道，主要是通過(guò)酶解的方法從水產(chǎn)動(dòng)物體或牛乳乳清蛋白源獲得ACE抑制肽，酶解過(guò)程通常都需要通過(guò)添加酸或堿來(lái)調(diào)節(jié)體系的pH值，這無(wú)疑影響了獲得的ACE抑制肽產(chǎn)品的功能特性，且增加了操作的繁瑣程度；還有的ACE抑制肽的制備方法在酶解后還有脫苦脫味的步驟，以改善水產(chǎn)動(dòng)物的腥味等不適口的味道，這些方法均不同程度地增加了操作步驟和生產(chǎn)成本，制約了產(chǎn)業(yè)化規(guī)模化ACE抑制肽的生產(chǎn)及蛋白肽的得率。另一方面，現(xiàn)有技術(shù)從水生生物中獲得的具有ACE抑制功能的肽往往僅具有ACE抑制功能，未發(fā)現(xiàn)有其他的生物活性功能，即產(chǎn)品性能單一。

目前國(guó)內(nèi)外專利中未見利用甲魚肉資源制備血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽的專利文獻(xiàn)報(bào)道。本發(fā)明針對(duì)目前甲魚蛋白產(chǎn)品開發(fā)的現(xiàn)狀，利用甲魚肉為原料，通過(guò)對(duì)甲魚肉的超聲波等預(yù)處理，在不添加任何酸和堿條件下，利用多種蛋白酶復(fù)合酶解，通過(guò)膜分離和凝膠分離技術(shù)，開發(fā)了同時(shí)具有特定降壓和抗氧化功能的甲魚蛋白肽，建立一套簡(jiǎn)單高效的多功能的甲魚蛋白肽的制備方法。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是在于提供一種具有ACE抑制和抗氧化功能的甲魚蛋白肽。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述甲魚蛋白肽的制備方法。

本發(fā)明的再一個(gè)目的在于提供上述甲魚蛋白肽的應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明提供了一種具有ACE抑制和抗氧化功能的甲魚蛋白肽及其制備方法，包括以下步驟:

(1)超聲處理去脂的甲魚肉漿液；

(2)加入復(fù)合蛋白酶進(jìn)行二步法酶解，酶解過(guò)程無(wú)需添加酸或堿調(diào)節(jié)pH值；

(3)對(duì)酶解液離心并取上清液通過(guò)二步超濾法處理；

(4)濾液過(guò)柱層析分離，收集洗脫峰，即得。

步驟(1)所述的甲魚肉漿液通過(guò)以下方式獲得：新鮮甲魚放血宰殺，取甲魚肉，用符合飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的清潔水清洗,魚肉清洗后在95℃水中保溫5-10分鐘，然后在甲魚肉中加入2.0～4.0倍的水，用打漿機(jī)將甲魚肉打成漿，通過(guò)6000～8000g離心10～15min，去上層脂肪，得到去脂的甲魚魚肉漿液。

其中，步驟(1)超聲處理方法為將去脂的甲魚肉漿液溫度調(diào)至55-65℃，25-30kH的超聲頻率處理15-25min。

本發(fā)明通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，甲魚肉漿液溫度調(diào)至55-65℃進(jìn)行超聲處理，效果最好，能夠較好地改變甲魚肉蛋白的組織結(jié)構(gòu)，使下面酶解步驟縮短酶解時(shí)間和較少的用酶量，就能夠獲得優(yōu)質(zhì)的蛋白肽。

在上述方法的步驟(2)二步法酶解中，第一步酶解加入的復(fù)合蛋白酶為堿性蛋白酶和菠蘿蛋白酶，二者質(zhì)量比為1-2:1，且加入的復(fù)合蛋白酶質(zhì)量為甲魚肉質(zhì)量的0.1％-0.3％。

優(yōu)選地，第一步酶解條件為55-65℃酶解1-2h。

在上述方法的步驟(2)二步法酶解中，第二步酶解加入的復(fù)合蛋白酶為木瓜蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶，二者質(zhì)量比為1:1-2，且加入的復(fù)合蛋白酶質(zhì)量為甲魚肉質(zhì)量的0.1％-0.3％。

優(yōu)選地，第二步酶解條件為50-60℃酶解1-2h。

第二步酶解結(jié)束之后于90-95℃下保溫3-5min，冷卻至室溫。

上述方法中，步驟(3)的兩步超濾法為先用孔徑大于5000D的膜超濾，再用孔徑為3000D的膜超濾，得到分子量小于3000D的蛋白肽。