[發明專利]一種消除PCR反應試劑自帶的內源核酸污染的方法在審
| 申請號： | 201610864218.0 | 申請日： | 2016-09-28 |
| 公開（公告）號： | CN106636332A | 公開（公告）日： | 2017-05-10 |
| 發明（設計）人： | 卿志榮;周雪;桑嘉欣 | 申請（專利權）人： | 江蘇睿玻生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/34 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 江蘇省南通市南通高新*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 消除 pcr 反應 試劑 內源 核酸 污染 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種消除聚合酶鏈式反應體系原材料中自帶的內源污染，防止PCR假陽性存在的方法，其特征在于，包括步驟：
(1)、依據供貨商提供的資料確定DNA聚合酶和dNTP的來源菌株，利用NCBI數據庫，以來源菌株的種類為首選，對設計的引物進行序列比對，找尋潛在的結合位點，確認可能存在的污染片段；
(2)、對污染片段進行酶切位點分析，找出序列中存在的限制性核酸內切酶，選取適宜的II型限制性核酸內切酶；
(3)、將PCR反應體系在適宜的酶切溫度下孵育一段時間，從而使得所述的限制性核酸內切酶完全消化反應體系中存在的內源核酸污染；
(4)、滅活PCR反應體系中的所述II型限制性核酸內切酶，從而獲得II型限制性內切酶被滅活的PCR反應體系。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的污染物是PCR反應試劑自帶的內源核酸污染物，能夠影響后續的PCR實驗結果。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(3)中，在酶切溫度下的孵育時間為5-50分鐘，最佳孵育時間為10-15分鐘。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的II型限制性核酸內切酶選自下組：BamHI、DpnI、EcoRI、EcoRV、HindIII、KpnI、PstI、SacI、SalI、XbaI。
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