[發(fā)明專利]一種硫酸魚(yú)精蛋白副凝固實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610863817.0
• 申請(qǐng)日: 2016-09-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106645034A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-05-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周靜;楊新春;張崇唯
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)華西醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N21/47
• 分類號(hào): G01N21/47
• 代理公司: 成都高遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)51222
• 代理人: 李高峽,張娟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種硫酸魚(yú)精蛋白副凝固實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

彌散性血管內(nèi)凝血(disseminated intravascular coagulation；DIC)不是一種獨(dú)立的疾病，而是許多疾病在進(jìn)展過(guò)程中產(chǎn)生凝血功能障礙的最終共同途徑，是一種臨床病理綜合征。由于血液內(nèi)凝血機(jī)制被彌散性激活，促發(fā)小血管內(nèi)廣泛纖維蛋白沉著，導(dǎo)致組織和器官損傷；另一方面，由于凝血因子的消耗引起全身性出血傾向。兩種矛盾的表現(xiàn)在DIC疾病發(fā)展過(guò)程中同時(shí)存在，并構(gòu)成特有臨床表現(xiàn)。在DIC已被啟動(dòng)的患者中引起多器官功能障礙綜合征將是死亡的主要原因。國(guó)內(nèi)尚無(wú)發(fā)病率的報(bào)道。DIC病死率高達(dá)31％～80％。因此，準(zhǔn)確檢測(cè)彌散性血管內(nèi)凝血顯得尤為重要。

1999年10第七屆全國(guó)血栓與止血學(xué)術(shù)會(huì)上提出的1999年10第七屆全國(guó)血栓與止血學(xué)術(shù)會(huì)上，提出了經(jīng)典的血漿蛋白副凝固實(shí)驗(yàn)用于診斷彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)，但是由于其純手工操作，肉眼判斷結(jié)果，導(dǎo)致準(zhǔn)確度不高，臨床的認(rèn)可度不是太高，目前有被更為靈敏和特異的D-二聚體和纖維蛋白降解產(chǎn)物(FDP)取代的趨勢(shì)。而D-二聚體和纖維蛋白降解產(chǎn)物檢測(cè)的成本太高。DIC的發(fā)生首先是纖維蛋白單體(FM)的出現(xiàn)，而目前測(cè)定纖維蛋白單體(FM)的試劑相當(dāng)昂貴，而且需要特殊儀器。

急需提供一種成本低廉、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確的檢測(cè)方法能測(cè)定或反應(yīng)FM的存在。或者能找到D-D、FDP的替代方法。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種成本低廉、靈敏度和特異性高的檢測(cè)方法，具體是血漿蛋白副凝固實(shí)驗(yàn)的改良方法。

本發(fā)明一種硫酸魚(yú)精蛋白副凝固實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方法，步驟如下：取待檢血漿，加入濃度為0.005g/ml的硫酸魚(yú)精蛋白溶液，測(cè)定反應(yīng)體系的散射光強(qiáng)度變化。

反應(yīng)體系中，若有纖維蛋白凝塊的形成，樣品的散射光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，儀器把這種光學(xué)變化描繪成凝固曲線，當(dāng)樣品完全凝固以后，散射光的強(qiáng)度得以穩(wěn)定，同時(shí)記錄凝固時(shí)間(T)和曲線上升高度(dH)。

優(yōu)選地，儀器自動(dòng)加樣，和/或先將待檢血漿預(yù)熱到37℃。

優(yōu)選地，所述硫酸魚(yú)精蛋白溶液的加入量為血漿的1/4。

其中，測(cè)定反應(yīng)體系的散射光強(qiáng)度變化采用全自動(dòng)凝血分析儀如，型號(hào)為SYSMEX CA7000的全自動(dòng)凝血分析儀檢測(cè)。

本發(fā)明方法可以準(zhǔn)確、有效地檢測(cè)彌散性血管內(nèi)凝血，而且成本非常低廉，適用于臨床使用，應(yīng)用前景非常良好。

下面通過(guò)具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但是并不是對(duì)本發(fā)明的限制，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

附圖說(shuō)明

圖1陰性實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖；

圖2陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖；

圖3試劑名稱及位置設(shè)置圖；

圖4本發(fā)明方法的ROC曲線圖；

圖5現(xiàn)有方法的ROC曲線圖；

圖6本發(fā)明方法與FM檢測(cè)的ROC曲線圖；

圖7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(陰性樣本)；

圖8重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(陽(yáng)性樣本)。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1 本發(fā)明硫酸魚(yú)精蛋白副凝固實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方法

1、檢測(cè)儀器和試劑

光學(xué)法凝血測(cè)定儀，SYSMEX公司CA7000。

硫酸魚(yú)精蛋白試劑，北京悅康凱悅制藥有限公司生產(chǎn)的硫酸魚(yú)精蛋白注射液(5ml：50mg)，其中硫酸魚(yú)精蛋白的濃度為0.01g/ml。

2、檢測(cè)方法

反應(yīng)管中加入血漿120uL，37℃預(yù)溫3分鐘，加入硫酸魚(yú)精蛋白溶液與生理鹽水的混合溶液30uL(硫酸魚(yú)精蛋白注射液：生理鹽水的體積比1：1)，加入試劑后檢測(cè)反應(yīng)體系的散射光強(qiáng)度變化。

判定標(biāo)準(zhǔn)：在600s內(nèi)，散射光強(qiáng)度的反應(yīng)曲線沒(méi)有變化，判定為陰性(如圖1所示)；反之，600s內(nèi)散射光強(qiáng)度的反應(yīng)曲線升高則判定為陽(yáng)性(如圖2所示)。

以下用是實(shí)驗(yàn)例的方式來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的有益效果：

實(shí)驗(yàn)例1 本發(fā)明方法的靈敏度和特異性

1、實(shí)驗(yàn)方法

采用光學(xué)法凝血測(cè)定儀，SYSMEX公司CA7000，根據(jù)圖3設(shè)置檢測(cè)方案(試劑量，樣本量，加樣時(shí)間，反應(yīng)檢測(cè)時(shí)間等)，試劑名稱及位置后，采用實(shí)施例1的方法，進(jìn)行靈敏度和特異性的檢測(cè)。

2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果