[發明專利]一種雞腸炎沙門氏菌感染抗性分子標記的檢測方法及其應用

有效

• 申請號: 201610861722.5
• 申請日: 2016-09-29
• 公開（公告）號: CN106636331B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 李顯耀;薛念國;王莎莎;吳桂賢
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及基因工程技術領域，提供了一種雞腸炎沙門氏菌感染抗性分子標記??相關基因LRP5的檢測方法及其應用，該方法提供了以雞LRP5基因rs80757564位點作為分子標記，對應提供了分型引物和對應PCR條件，利用上述引物和方法，可以準確檢測雞感染腸炎沙門氏菌后LRP5基因的基因型，選擇腸炎沙門氏菌感染抗性強的個體，為雞抗腸炎沙門氏菌感染的育種提供理論依據。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，提供了一種雞腸炎沙門氏菌感染抗性分子標記--相關基因LRP5的檢測方法及其應用。

背景技術

腸炎沙門氏菌屬于革蘭氏陰性桿菌，超過2500多種血清型，不僅能引起畜禽發病，造成養殖業嚴重經濟損失，而且也是食源性疾病的主要病原菌之一，能通過家禽副產品給人類的健康帶來較大威脅，是報道最頻繁的致病微生物之一。有關報道指出，2004年期間，在美國每1百萬人中有19000人因感染沙門氏菌而住院，多達300人因沙門氏菌感染出現死亡；在歐盟，2010年間約有99020起因沙門氏菌感染引起的食源性疾病暴發。

家禽及其相關加工產品是腸炎沙門氏菌的主要傳染源，腸炎沙門氏菌能夠透過蛋殼進入雞蛋產品中，且能在生殖道中寄存繁殖。目前控制沙門氏菌感染的方法主要是使用疫苗和抗生素，但這不能從根本上解決問題，而且抗生素的大量使用會引起食品安全問題及細菌的耐藥性，且造成菌株耐藥性增強。隨著分子遺傳學的發展，提高畜禽對疾病和病原的遺傳抗性，為控制沙門氏菌感染提供可能性，但是現有技術中缺乏相應的技術啟示存在。

發明內容

本發明的發明人針對上述現有技術的情況，提供了一種雞腸炎沙門氏菌感染抗性分子標記--相關基因LRP5的檢測方法及其應用，該方法提供了以雞LRP5基因rs80757564位點作為分子標記，對應提供了分型引物和對應PCR條件，利用上述引物和方法，可以準確檢測雞感染腸炎沙門氏菌后LRP5基因的基因型，為雞抗腸炎沙門氏菌感染的育種提供理論依據。

發明人提供的具體技術方案如下：

本發明所述的雞腸炎沙門氏菌感染抗性分子標記為相關基因LRP5基因rs80757564位點；

發明人首先根據雞LRP5基因rs80757564位點兩側序列，設計用于基因分型的引物。

利用所設計引物，發明人進行PCR反應，其PCR擴增反應體系如下表：

基因分型PCR體系(20uL)

PCR反應程序：95℃2min，40個循環(94℃30s，56℃90s，65℃30s)，65℃10min。根

據上述方法擴增后對擴增產物進行測序，獲得每個個體的基因型，之后利用SAS方差分析和平板計數法，獲得雞盲腸內容物含菌量與SNP基因型相關性結果，見下表：

SNP位點基因型和盲腸內容物腸炎沙門氏菌含菌量相關性分析

可見不同基因型個體的盲腸含菌量存在明顯差異，TT型個體盲腸含菌量顯著高于GG型個體(P0.01)，GG基因型個體對腸炎沙門氏菌感染抗性高于TT基因型。該位點可以作為雞腸炎沙門氏菌抗性育種的分子標記，在實際育種過程中，可以選擇GG基因型個體，以提高雞群對腸炎沙門氏菌感染的抗性。從而實現雞腸炎沙門氏菌感染抗性分子標記在雞抗腸炎沙門氏菌感染的育種中的應用。

上述過程中的待測雞只為人工接種雞只，方法如下：

利用平板計數法，對剛孵化的濟寧百日雞進行腸炎沙門氏菌陰性檢測，選擇190只腸炎沙門氏菌陰性個體進行接種試驗。