[發明專利]一種用于檢測病理組織切片中癌蛋白表達的單克隆抗體

在審

• 申請號: 201610859309.5
• 申請日: 2016-09-28
• 公開（公告）號: CN107868127A
• 公開（公告）日: 2018-04-03
• 發明（設計）人: 常小迦;時成龍;韓鳳麗;劉巖;施麗君
• 申請（專利權）人: 艾托金生物醫藥（蘇州）有限公司
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;C12N15/13;A61K39/42;A61P31/20;A61P35/00;G01N33/68;G01N33/569;G01N33/574
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司31266
• 代理人: 陳詳,徐嘉慧

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，具體地本發明涉及用于癌癥病理切片癌蛋白檢測的單克隆抗體及其應用,更具體地本發明涉及由高危HPV導致的癌癥中HPV E7蛋白表達的檢測。

背景技術

宮頸癌是女性生殖系統的常見惡性腫瘤，位居女性惡性腫瘤第二位，晚期癌5年生存率低，在世界范圍內具有較高的發病率和死亡率。1976年zur Hansen提出人乳頭瘤病毒(HPV)可能是性傳播致癌因素，并開始研究HPV與宮頸癌之間的關系。目前，許多流行病學已證實HPV是導致宮頸癌的元兇，還可以引起多種其它腫瘤,包括生殖道、乳腺、消化道及呼吸道癌癥。zur Hansen也因此于2008年獲得諾貝爾生理學或醫學獎。HPV近年來在我國人群中的傳播有增無減，故宮頸癌預防、治療的研究工作非常重要。

80％的女性在其一生中都會感染HPV病毒，大多數HPV感染在1-2年內會被自身免疫系統所清除，而持續存在的HPV感染將會演變為高度宮頸上皮內瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)損傷，如CIN II和CIN III，甚至進一步演變為宮頸癌。據統計，約20％的低度宮頸損傷將轉變為高度損傷，如果不及時治療，其中30％將會進一步轉為惡性腫瘤。多數中晚期子宮頸癌的病理形態顯而易見，診斷并不困難。但是，對于早期子宮頸癌，及其癌前病變的診斷至今依然是研究的重點。在正常宮頸上皮→CIN→宮頸癌這一進展過程中，除發生了組織學、細胞學形態的相應改變，某些基因結構、功能等都會發生變化，這些基因可作為這一進展中的分子標志，以便早期發現、診斷CIN和宮頸癌。如Ki67、p16^INK4A、,hTERT等隨CIN級別增高而表達增加(Valentina F，Renzo B，Serena B，et al.,Detection of HPV E7Oncoviral protein in cervical lesions by a new antibody.Appl immunohistochem Mol Morphol,2013,21(4):341-350)。近年來研究顯示，抑癌基因p16^INK4A在大部分宮頸癌和癌前病變中過表達，認為可將p16^INK4A蛋白作為一種生物學標志物進行宮頸癌的早期篩查。

HPV持續感染是引起宮頸上皮內癌變的主要病毒致病因素。在中國，高危型HPV16、18、31、33、52和58是宮頸鱗狀上皮癌中檢出率最高的幾個亞型。新近一些研究顯示，p16^INK4A的過表達與HPV持續感染和宮頸癌密切相關(Kalof AN,Cooper K.,p16INK4a immunoexpression:surrogate marker of high-risk HPV and high-grade cervical intraepithelial neoplasia.Adv Anat Pathol.2006Jul；13(4):190-4.)。癌癥發生過程中病毒DNA整合入人體細胞基因組內，隨著E7蛋白表達控制的缺失將持續表達病毒致癌蛋白E7，使細胞持續分化和發生癌前病變，導致細胞調控失控，發生永生化。E7蛋白可優先與視網膜母細胞癌蛋白pRB結合并使其失活。由于p16^INK4A與pRB質檢存在負反饋調節，HPV E7蛋白是pRB失活后，使得pRB對p16^INK4A的負反饋調節作用喪失，從而導致p16^INK4A在HPV感染陽性的宮頸鱗癌中有很高的陽性表達率。2012年7月，美國病理學家協會(CAP)和美國陰道鏡和宮頸病理學會(ASCCP)指南指出，p16可作為反映HPV E6/E7影響細胞增殖的標志物，有足夠證據表明能夠用于低級別肛門-生殖道鱗狀上皮病變相關推薦，建議使用特定克隆號(E6H4)的p16^INK4a抗體作為檢測HPV感染是否影響到細胞周期調控的生物標志物。該克隆號是全球唯一獲得IVD認證的p16^INK4a抗體。羅氏診斷CINtec組織學p16(包含p16抗體E6H4)已于2014年5月在中國上市。因此，在HPV感染導致的高度宮頸非典型增生和宮頸癌病人的上皮細胞內持續表達的E7蛋白，在宮頸癌的發病機制中位于p16^INK4a的上游，其本身也可作為高度宮頸損傷和宮頸癌檢測的一個腫瘤標志物。