[發(fā)明專利]基于納米模擬酶的可視化快速檢測生物酶、蛋白質(zhì)及其抑制劑的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610852201.3 | 申請日： | 2016-09-26 |
| 公開（公告）號： | CN106399457B | 公開（公告）日： | 2019-08-06 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 魏輝;程翰俊 | 申請（專利權(quán)）人： | 南京大學(xué) |
| 主分類號： | C12Q1/46 | 分類號： | C12Q1/46;C12Q1/34 |
| 代理公司： | 南京蘇高專利商標事務(wù)所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 王艷 |
| 地址： | 210008 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 生物酶 可視化檢測 模擬酶 蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì)活性 檢測試劑 納米材料 抑制劑 催化氧化能力 高靈敏檢測 天然氧化酶 抑制劑活性 快速檢測 生物催化 物理信號 線性關(guān)系 顏色變化 氧化反應(yīng) 可視化 天然酶 顯色劑 消耗 釋放 輸出 檢測 | ||
1.一種非治療診斷目的的基于納米模擬酶的可視化快速檢測生物酶活性的方法，其特征在于，包括以下步驟：
1）納米模擬酶的制備：利用濕法化學(xué)制備納米氧化鈰，經(jīng)分離、純化并測定其濃度后備用；
2）檢測試劑緩沖液的制備：配制pH分別為7.0或4.5，濃度為5 mM 的磷酸緩沖溶液待用；
3）檢測生物酶活性的檢測試劑的制備：取一定量的3,3,5,5-四甲基聯(lián)苯胺、ATP以及待測生物酶的反應(yīng)底物乙酰膽堿溶液或尿素溶液加入到配制好的磷酸緩沖溶液中，混合均勻后待用；
4）生物酶活性的可視化檢測：將上述檢測試劑與含有待測檢測生物酶的樣品以及一定量的所述納米模擬酶混合后在37℃下孵育反應(yīng)，然后根據(jù)檢測試劑顏色的變化或通過肉眼觀察對待測生物酶的活性進行半定量的判斷；或通過相應(yīng)的儀器對待測生物酶的活性進行精確的測定和定量；
其中，所述生物酶為乙酰膽堿酯酶和脲酶中的一種，當(dāng)所述生物酶為乙酰膽堿酯酶時，所述反應(yīng)底物為乙酰膽堿溶液，所述檢測試劑緩沖液的pH為7.0；當(dāng)所述生物酶為脲酶時，所述反應(yīng)底物為尿素溶液，所述檢測試劑緩沖液的pH為4.5。
2.一種非治療診斷目的的基于納米氧化酶可視化快速檢測生物酶抑制劑活性的方法，其特征在于，所述方法包括權(quán)利要求1所述的步驟1）~3），還包括步驟4）生物酶對應(yīng)抑制劑的可視化檢測：將已知活性的生物酶與對應(yīng)的抑制劑混合后作用一段時間得到混合物，然后將該混合物與步驟2）的檢測試劑緩沖液、步驟3）的檢測試劑以及一定量的步驟1）的納米模擬酶混合后在37℃下孵育反應(yīng)，最后根據(jù)檢測試劑顏色的變化或通過肉眼觀察對待測生物酶的抑制劑進行半定量的判斷；或通過相應(yīng)的儀器對待測生物酶的抑制劑進行精確的測定和定量；
其中，所述生物酶為乙酰膽堿酯酶和脲酶中的一種，當(dāng)所述生物酶為乙酰膽堿酯酶時，所述反應(yīng)底物為乙酰膽堿溶液，所述檢測試劑緩沖液的pH為7.0；當(dāng)所述生物酶為脲酶時，所述反應(yīng)底物為尿素溶液，所述檢測試劑緩沖液的pH為4.5。
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