[發明專利]一種新型植物轉基因方法

在審

• 申請號: 201610845970.0
• 申請日: 2016-09-23
• 公開（公告）號: CN107868796A
• 公開（公告）日: 2018-04-03
• 發明（設計）人: 李陽
• 申請（專利權）人: 武漢伯遠生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/87;A01H5/00
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司31253
• 代理人: 馮子玲

1.一種新型植物轉基因方法，其特征在于，將配置好的轉化液作用于植物分生組織區進行轉化侵染，保持溫度20-28攝氏度，保持分生組織表面有液體存在，轉化侵染2-3天后進行正常培養，對植物干細胞群進行轉化進一步發育成轉基因苗，長出新的叢生苗待PCR分子鑒定后，在體生長進一步結種子或者切下生根成新的幼苗長成一個完整的轉基因植株。

2.如權利要求1所述的一種新型植物轉基因方法，其特征在于，轉化侵染采用農桿菌侵染方式，轉化液是將構建好的轉基因載體轉入農桿菌中，將鑒定好的農桿菌菌液重新用侵染液懸浮，控制OD值0.1-1.5。

3.如權利要求1所述的一種新型植物轉基因方法，其特征在于，轉化侵染采用DNA直接滲透的方式，轉化液是將DNA直接溶解在侵染液中控制DNA濃度200ng/ul以上。

4.如權利要求1所述的一種新型植物轉基因方法，其特征在于，轉化液是能促進DNA或者T-DNA進入植物分生組織細胞內的并且有利于外源DNA整合進植物基因組的培養液體，所述轉化液至少包含表面活性劑、細胞分裂素、生長素、基礎培養基、碳源和氮源,pH值為5.0-6.0。

5.如權利要求4所述的一種新型植物轉基因方法，其特征在于，所述細胞分裂素含量為0.1-25mg/L，可以是6-ba、kt、zt、tdz中的至少一種。

6.如權利要求4所述的一種新型植物轉基因方法，其特征在于，所述表面活性劑重量含量0.1-0.5%，可以是NP40、tween20、PEG、triton X-100、silwet 77、甜菜堿中的至少一種。

7.如權利要求4所述的一種新型植物轉基因方法，其特征在于，所述生長素含量為0-20mg/L，可以是IAA、NAA、2,4-D中的至少一種。

8.如權利要求4所述的一種新型植物轉基因方法，其特征在于，所述基礎培養基是包含銨態氮和硝態氮的培養基。

9.如權利要求4所述的一種新型植物轉基因方法，其特征在于，所述碳源中除了其他糖類須包含葡萄糖5-20g/L。

10.如權利要求4所述的一種新型植物轉基因方法，其特征在于，所述氮源可以是酸水解酪蛋白、脯氨酸以及谷氨酰胺的至少一種。