[發明專利]一種廣東煙區黃瓜花葉病毒膠體金快速檢測試紙條

有效

• 申請號: 201610844103.5
• 申請日: 2016-09-22
• 公開（公告）號: CN106596931B
• 公開（公告）日: 2018-06-26
• 發明（設計）人: 鄧海濱;阮小蕾;陳澤鵬;王政仁;王曉賓;邱妙文;陳永明;易龍
• 申請（專利權）人: 廣東省煙草南雄科學研究所;華南農業大學;中國煙草總公司廣東省公司
• 主分類號: C12N5/12
• 分類號: C12N5/12
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

本發明公開一種廣東煙區黃瓜花葉病毒膠體金快速檢測試紙條。試紙條由樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜、吸收墊依次粘附在不吸水的支撐薄片上，其特征在于，在所述的結合墊上吸附有膠體金標記的CMV特異抗體，并且還有膠體金標記的CMV特異抗體以條帶狀固定在硝酸纖維膜的檢測線T線處，膠體金標記的抗CMV特異抗體的二抗固定在硝酸纖維膜的控制線C處；本發明的廣東煙區黃瓜花葉病毒膠體金快速檢測試紙條體積小、攜帶方便，不需要儀器設備，操作簡單。可現場檢測，在3?10min出結果；結果可由肉眼根據T線顏色的深淺進行判斷。這種方法非常適合對大批量樣品進行現場初篩，在實際生產中很有應用價值。

技術領域：

本發明屬于煙草病毒檢測領域，具體涉及一種廣東煙區黃瓜花葉病毒膠體金快速檢測試紙條。

背景技術：

黃瓜花葉病毒(Cucumber mosaic virus，CMV)是侵染煙草的主要病毒之一。它引發的病毒病每年導致煙草產業巨大的經濟損失。快速、準確地定性檢測CMV是生產上防控病害減少損失的重要手段之一。

在科學研究中，植物病毒的檢測方法主要有生物學檢測法(癥狀類型辨別、鑒別寄主等)、電鏡技術、血清學檢測法(酶聯免疫吸附反應(Enzyme linked immunosorbentassay，ELIS A)等)和分子生物學檢測法(包括PCR技術、核酸探針技術等)等。分離病毒照電鏡雖然是診斷病毒的有效手段，其特異性強，但非常費時費力，需要專業的技術人員，不適合推廣使用；血清學檢測方法比較費時、費力，免疫熒光、ELLSA等方法雖然具有微量、特異、快速、準確的優點，但需要比較完備的試驗儀器和經驗豐富的技術人員來操作和判斷結果，檢測一批樣品整個流程需要4～8小時，對于基層工作場所很難做到；PCR及核酸探針的診斷更需要有特殊的儀器和藥品，技術含量很高，一般只適于實驗室診斷或研究應用，很難在基層推廣。

1971年膠體金作為標記物開始用于免疫組織化學。Faulk等應用電鏡免疫膠體金染色法觀察沙門氏菌。許多學者進一步證實膠體金能穩定迅速地吸附蛋白質，而蛋白質的生物活性無明顯改變。它可以作為探針進行細胞表面和細胞內多糖、蛋白質、多肽、抗原、激素、核酸等生物大分子的精確定位，也可以用于日常的免疫診斷，進行免疫組織化學定位。

膠體金溶液是指分散相粒子直徑在l～150nm之間的金溶膠，屬于多相不均勻體系，顏色呈桔紅色到紫紅色。免疫膠體金層析技術(Gold immunochromatography assay,GICA)作為一種新的免疫學檢測方法，是20世紀80年代在免疫膠體金標記技術基礎上建立起來的一種新型獨特的診斷技術。這項技術將膠體金標記技術、免疫檢測技術、層析分析技術、單(多)克隆抗體技術和新材料技術等多種方法有機結合在一起，具有簡單、快速、準確、無污染、操作簡單和無需特殊設備等優點，在醫學、動植物檢疫、食品安全監督各領域得到了日益廣泛的應用。

20世紀90年代初到中期,膠體金標記免疫層析診斷技術開始進入商業化應用。利用這種技術開發的膠體金快速檢測試紙條具有操作簡便、快捷、可單份檢測、便于保存、不需特殊設備等優點，可在現場(臨床)對目標病原進行初篩，節省大量的人力、物力。在醫學領域，這種技術除用于激素、傳染病病原的抗原和抗體、細菌、寄生蟲的檢測外，還發展到了對毒品等小分子物質的檢測。檢測的標本類型也涵蓋了血清、血漿、全血、尿、糞便及唾液等，顯示出了廣闊的前景和巨大的應用價值。

膠體金試紙條在國內主要應用于醫學領域和畜牧獸醫領域。在農牧領域，較少有成熟的產品，更多的出現在相關的科研項目中。孫艷等(2011)應用膠體金技術進行了黃瓜細菌性角斑病(Pseudomona.s.syringae pv.Lachrymans)的快速檢測研究。國內涉及到煙草病毒病檢測的商用膠體金試紙條非常少。國外的商品化試紙條非常昂貴，價格在50～60元人民幣/張，不適于生產上大批煙苗的檢測使用。

因此，迫切需要建立一種簡單、快速、靈敏、廉價并且適合于基層應用的病毒診斷方法。

發明內容：