[發明專利]一種基于聚多巴胺復合膠囊標記的凝血酶核酸適配體光電化學傳感器

有效

• 申請號: 201610841305.4
• 申請日: 2016-09-22
• 公開（公告）號: CN106248750B
• 公開（公告）日: 2018-03-27
• 發明（設計）人: 范大偉;王歡;王耀光;任祥;魏琴;杜斌;吳丹;馬洪敏;胡麗華
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26;G01N27/32;G01N27/327
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于聚多巴胺復合膠囊標記的凝血酶核酸適配體光電化學傳感器，其特征在于，包括以下步驟：

（1）在聚多巴胺膠囊溶液中滴加1~3 mL的1 mol/L的硝酸鎘溶液，充分振蕩，離心除去上層清液，得到Cd²⁺@聚多巴胺復合膠囊；加入2 mL凝血酶核酸適配體溶液，在4°C恒溫振蕩箱中振蕩2~6 h，離心去除上清液，得到Cd²⁺@聚多巴胺復合膠囊標記的凝血酶核酸適配體；加入2 mL的質量分數1%的牛血清白蛋白BSA溶液，常溫下振蕩1 h，離心除去上清液；再加入超純水2 mL，充分分散，得到Cd²⁺@聚多巴胺復合膠囊標記的凝血酶核酸適配體溶液，4°C冰箱儲存備用；

（2）將2.5×0.8 cm²的ITO電極依次浸沒在50°C的丙酮、水、乙醇和水中分別超聲清洗30 min，然后用高純氮氣吹干；滴加10 μL的1~6 mg/mL的TiO₂納米粒子懸浮液于ITO電極，用馬弗爐300~600°C煅燒后，得到TiO₂納米粒子修飾的ITO電極，冷卻到室溫；

（3）在TiO₂納米粒子修飾的ITO電極上，依次滴加6 μL的2~7 μmol/L凝血酶核酸適配體，質量分數1%的牛血清白蛋白，封閉非特異性結合位點，超純水沖洗，4°C冰箱中晾干；

（4）滴加1×10^-15~1×10^-11 mol/L一系列不同濃度的凝血酶溶液，反應30 min，超純水沖洗，4°C冰箱中晾干；

（5）滴加6 μL的Cd²⁺@聚多巴胺復合膠囊標記的凝血酶核酸適配體溶液到電極表面，反應20~40 min，超純水沖洗，4°C冰箱中晾干；

（6）滴加6 μL的0.1~1.0 mol/L的Na₂S溶液，反應10~30 min，用超純水沖洗，4°C冰箱中晾干，制備得到了一種基于聚多巴胺復合膠囊標記的凝血酶核酸適配體光電化學傳感器；

所述的聚多巴胺膠囊的制備方法包括以下步驟：

（1）將1~5 mL的質量體積分數為2.5%且直徑為300 nm的聚苯乙烯微球乙醇分散液加入到OP-10乳化劑中乳化5~15 min，然后分散到80 mL的10 mmol/L的pH 8.5三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液中，超聲分散10 min；加入20~60 mg多巴胺，在室溫下磁力攪拌反應2~48 h，離心分離，水洗三次，乙醇洗三次，得到聚多巴胺@聚苯乙烯微球，分散在乙醇中備用；

（2）將制備好的聚多巴胺@聚苯乙烯微球溶解分散到50~200 mL四氫呋喃中，磁力攪拌反應6~48 h，離心分離，然后依次用四氫呋喃、乙醇和水分別離心洗滌三次，離心結束后除去上層清液，得到聚多巴胺膠囊，加超純水分散。

2.如權利要求1所述的一種基于聚多巴胺復合膠囊標記的凝血酶核酸適配體光電化學傳感器，所述的TiO₂納米粒子，其特征在于，包括以下步驟：

取0.01~0.03 mol原鈦酸四丁酯溶解在20~40 mL乙醇溶液中，然后在磁力攪拌下向上述溶液中逐滴滴加10 mL的超純水，30°C反應60~180 min后，將懸濁液轉移到聚四氟乙烯內襯的高壓釜中，并保持在100~200°C條件下反應2~24 h；收集所制備的沉淀物，并分別用無水乙醇和超純水徹底離心洗滌各三次，然后在50°C真空干燥箱中干燥24 h，研磨成粉末備用。

3.如權利要求1所述的一種基于聚多巴胺復合膠囊標記的凝血酶核酸適配體光電化學傳感器用于凝血酶的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）采用三電極體系進行檢測，如權利要求1所制備的光電化學傳感器為工作電極，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，利用光電化學工作站進行檢測，光電檢測采用i-t測試手段，偏壓設置為0 V，光源為白光，每隔10 s進行開關燈；

（2）在10 mL含0.1 mol/L抗壞血酸的pH 7.4的PBS緩沖溶液中，通過光電化學工作站檢測1×10^-15~1×10^-11 mol/L一系列不同濃度的凝血酶標準溶液，通過記錄開關燈前后產生的不同光電流信號，繪制工作曲線；

（3）將待測樣品溶液代替凝血酶標準溶液進行檢測，檢測的結果可通過工作曲線的查得。