[發明專利]猴免疫缺陷病毒的RT-LAMP檢測引物組、試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201610839424.6
• 申請日: 2016-09-21
• 公開（公告）號: CN106636458B
• 公開（公告）日: 2018-08-14
• 發明（設計）人: 劉助紅;王靜;練月曉;黃碧洪;郭鵬舉;張鈺;黃韌
• 申請（專利權）人: 廣東省實驗動物監測所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 胡輝;鄭瑩

1.一種猴免疫缺陷病毒的RT-LAMP檢測引物組，包括一對外引物、一對內引物和一對環引物，其核苷酸序列分別如下所示：

外引物：

SIV-F3：5’- GCATTCACGCAGAAGAGA- 3’（SEQ ID NO:1）；

SIV-B3：5’- CTGGCACTACTTCTGCTC- 3’（SEQ ID NO:2）；

內引物：

SIV-FIP：5’- TCTGCTGTTCCTGTTTCCACCGAAACACACTGAGGAAGCA- 3’（SEQ ID NO:3）；

SIV-BIP：5’- ACCAACAGCACCATCTAGCGATGGCAGGTGGACATAGT- 3’（SEQ ID NO:4）；

環引物：

SIV-LF：5’- ACTAGGTGTCTCTGCACTATCT- 3’（SEQ ID NO:5）

SIV-LB：5’- ACCCAGTACAACAAATAGGTGG- 3’（SEQ ID NO:6）。

2.一種猴免疫缺陷病毒的RT-LAMP檢測試劑盒，其特征在于：該檢測試劑盒包括權利要求1所述的檢測引物組。

3.根據權利要求2所述的猴免疫缺陷病毒的RT-LAMP檢測試劑盒，其特征在于：該檢測試劑盒還包含DNA聚合酶、逆轉錄酶、RT-LAMP反應液、陽性對照和陰性對照。

4.根據權利要求3所述的猴免疫缺陷病毒的RT-LAMP檢測試劑盒，其特征在于：外引物、環引物、內引物的摩爾比為1：4：8。

5.根據權利要求3所述的猴免疫缺陷病毒的RT-LAMP檢測試劑盒，其特征在于：所述DNA聚合酶為Bst DNA聚合酶，所述逆轉錄酶為AMV逆轉錄酶。

6.根據權利要求3所述的猴免疫缺陷病毒的RT-LAMP檢測試劑盒，其特征在于：所述RT-LAMP反應液含有10mM dNTP、10×ThermoPol反應緩沖液、150mM MgSO₄水溶液。

7.根據權利要求3所述的猴免疫缺陷病毒的RT-LAMP檢測試劑盒，其特征在于：所述陽性對照為含有目的基因片段的質粒DNA，陰性對照為DEPC水。

8.根據權利要求2~7任一項所述的RT-LAMP檢測試劑盒的使用方法，包括如下步驟：

1）提取待檢樣品RNA；

2）反轉錄環介導等溫擴增反應：配制25μl反應體系，含有SIV-F3 0.2μM，SIV-B3 0.2μM，SIV-FIP 1.6μM，SIV-BIP 1.6μM，SIV-LF 0.8μM，SIV-LB 0.8μM，RT-LAMP反應液12.5μl，DNA聚合酶8U，逆轉錄酶2.5U，待檢RNA 1~100ng，用DEPC水補齊到25μl；然后于63～65℃反應45～60min；

3）結果分析：通過肉眼觀察反應管中溶液是否變渾濁或通過瓊脂糖凝膠電泳分析是否出現梯狀條帶判定結果；如反應管中溶液變渾濁或電泳出現梯狀條帶即為陽性，否則，為陰性，

該使用方法用于非疾病診斷目的。