[發明專利]一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒血清學鑒別診斷試劑盒

有效

• 申請號: 201610837267.5
• 申請日: 2016-09-21
• 公開（公告）號: CN106645712B
• 公開（公告）日: 2018-06-22
• 發明（設計）人: 陳如敬;吳學敏;周倫江;陳秋勇;車勇良;嚴山;王晨燕;王隆柏;魏宏;劉玉濤
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院畜牧獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

本發明提供一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒血清學鑒別診斷試劑盒。本發明建立的PRRSV血清學鑒別診斷試劑盒主要針對PRRSV類型有經典美洲型PRRSV、歐洲型PRRSV和高致病性PRRSV進行血清學鑒別診斷。第1個ELISA板的包被抗原是PRRSV歐洲型和美洲型共同抗原表位串聯優化表達后的蛋白；第2個ELISA板的包被抗原是PRRSV歐洲型獨特型抗原表位優化表達后的蛋白；第3個ELISA板的包被抗原是PRRSV美洲型獨特型抗原表位優化表達后的蛋白；第4個ELISA板的包被抗原是高致病性PRRSV的Nsp2基因缺失區核苷酸序列表達的蛋白。經上述檢測后，即可明確豬血清中PRRSV感染類型及抗體水平。本方法簡便快捷，可有效用于不同類型PRRSV的臨床血清學診斷。

技術領域

本發明屬于動物傳染病學領域，具體涉及一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）血清學鑒別診斷試劑盒。

背景技術

豬繁殖與呼吸綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndromevirus， PRRSV）屬于網巢病毒目（Nidovirales）動脈炎病毒科（Arteriviridae）動脈炎病毒屬（Arterivirus），該類病毒為單股正鏈RNA病毒。PRRSV基因組長約15kb，分別為（5’端至3’端）：非結構蛋白ORF1（ORF1a和ORF1b）、結構蛋白ORF2a（GP2a）、ORF2b（GP2b）、ORF3（GP3）、ORF4（GP4）、ORF5（GP5）、ORF6（M）和ORF7（N）。PRRSV基因組結構和其他動脈炎病毒組基因組結構相似，在病毒的5’端有帽子結構，3’端多聚腺苷酸化。其非結構蛋白ORF1占基因組全長的75%左右，包含有PRRSV復制所需的酶類，參與病毒的增殖過程，可進一步細分為Nsp1、Nsp2、Nsp3、Nsp4、Nsp5、Nsp6、Nsp7、Nsp9、Nsp1和Nsp11共10種非結構蛋白。結構蛋白中ORF2-ORF6編碼病毒的囊膜蛋白，其中ORF2-ORF5編碼的蛋白均為糖基化蛋白（GP2、GP3、GP4和GP5）而ORF6編碼的M蛋白為非糖基化蛋白；ORF7編碼病毒的核衣殼蛋白（N），有較強的免疫原性。

豬繁殖與呼吸綜合征是由PRRSV引起的，可導致妊娠母豬發熱、厭食及繁殖障礙（如流產、早產、死胎、木乃伊胎），新生及斷奶仔豬高死亡率的仔豬呼吸道疾病，俗稱豬“藍耳病”。根據PRRSV的血清學和基因組特征分析，PPRSV可細分為洲型（代表株為VR2332株）和歐洲型（代表株為LV株）。2006年，我國南方地區大部分豬場出現以高熱、高發病率和高死亡率為特征的傳染病，即豬“高熱病”，給我國養豬業造成極大損失。經國內各位豬病專家聯合攻關，明確為該病病原為 “高致病性藍耳病”（即HP-PRRSV）。對HP-PRRSV基因組分析比較發現，HP-PRRSV在非結構蛋白2（Nsp2）存在連續核苷酸（約87個核苷酸，29個氨基酸）缺失。2008年，歐洲型PRRSV在我國福建和浙江豬群中首次發現報道，隨后在我國多省市均檢測到歐洲型PRRSV感染陽性。

目前，我國豬群中PPRSV感染的類型較為復雜，為了更好的預防和控制PRRSV的流行，需要對豬群PRRSV血清學抗體進行科學有效區分。從病原學來看，根據歐洲型和美洲型PRRSV的基因組差異已見有RT-PCR方法和實時熒光定量PCR方法；此外，根據HP-PRRSV和美洲型PRRSV的基因組差異（主要是Nsp2）已見有RT-PCR方法和實時熒光定量PCR方法，但是上述實驗方法（RT-PCR方法和實時熒光定量PCR方法）對實驗操作者操作技能和實驗儀器設備要求較高，不適宜臨床現場使用。從血清學來看，已見有歐洲型和美洲型PRRSV鑒別診斷ELISA方法報道；此外，也見有HP-PRRSV和美洲型PRRSV的基因組差異鑒別診斷ELISA報道。但是，當前未見可同時區分歐洲型PRRSV、美洲型PRRSV和HP-PRRSV的血清學鑒別診斷試劑盒報道。