[發(fā)明專利]一種基于金-石墨烯納米組裝體對Mucin-1手性信號超靈敏檢測的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610834319.3
• 申請日: 2016-09-20
• 公開（公告）號: CN106323882B
• 公開（公告）日: 2018-11-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 匡華;付盼;胥傳來;徐麗廣;馬偉;劉麗強;宋珊珊;胡擁明
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: G01N21/25
• 分類號: G01N21/25
• 代理公司: 無錫市大為專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時旭丹;張仕婷

一種基于金?石墨烯納米組裝體對Mucin?1手性信號超靈敏檢測的方法，屬于材料化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明包括金納米粒子的合成，石墨烯納米材料的準(zhǔn)備，金納米粒子與Mucin?1適配體的偶聯(lián)，石墨烯與Mucin?1適配體部分互補序列的偶聯(lián)，以及金?石墨烯納米結(jié)構(gòu)的組裝和之后的TEM和手性信號的表征和測定。基于不同Mucin?1濃度對金?石墨烯組裝體的解離程度不一樣從而影響其手性信號的強弱來建立Mucin?1濃度與金?石墨烯組裝體手性信號的關(guān)系，來實現(xiàn)Mucin?1的定量檢測。本發(fā)明提供了能夠通過圓二色信號超靈敏檢測Mucin?1含量的方法，制備出了圓二色性能高，生物穩(wěn)定性好的金?石墨烯自組裝納米結(jié)構(gòu)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種基于金-石墨烯納米組裝體對Mucin-1手性信號超靈敏檢測的方法，屬于材料化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

黏蛋白是重要的糖蛋白，它是由在粘膜表面的粘液凝膠層組成。粘蛋白固定在細胞表面形成凝膠基質(zhì)，作為細胞的防御屏障，其黏膜保護和通信與外部環(huán)境發(fā)揮了重要作用。粘蛋白家族包括21個成員名叫Muc1-muc21，已分為分泌型和膜型。其中，粘蛋白1（Mucin-1）是由一個疏水的跨膜結(jié)構(gòu)域，胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域，和胞外結(jié)構(gòu)域構(gòu)成。Mucin-1 是一種廣泛表達于導(dǎo)管上皮細胞的跨膜糖蛋白，其多肽骨架由多個串聯(lián)的重復(fù)序列( variablenumber of tandem repeats，VNTR) 組成。正常導(dǎo)管上皮細胞中 Mucin-1 的 VNTR 結(jié)構(gòu)域高度糖基化，而 IBD 患者結(jié)腸上皮組織中高表達一種 VNTR結(jié)構(gòu)域低糖基化的突變型Mucin-1。Mucin-1是已知的與多種癌癥（如乳腺癌、胃癌和肺癌）的發(fā)生相關(guān)。因此，靈敏的檢測Mucin1在腫瘤的初步診斷中具有非常重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種基于金-石墨烯納米組裝體對Mucin-1手性信號超靈敏檢測的方法，首先通過在金納米粒子的表面修飾Mucin 1的適配體，在石墨烯表面修飾與Mucin-1適配體部分互補的序列，隨著DNA的雜交組裝成金-石墨烯納米自組裝體，并對其圓二色性質(zhì)進行了研究和探討。加入不同濃度的Mucin-1溶液，對金-石墨烯自組裝體的手性信號進行測試，以達到對Mucin-1的超靈敏檢測的目的。

本發(fā)明的技術(shù)方案，一種基于金-石墨烯納米組裝體對Mucin-1手性信號超靈敏檢測的方法，將偶聯(lián)有Mucin-1適配體的金納米粒子和偶聯(lián)有與Mucin-1適配體部分互補序列的石墨烯組裝得到金-石墨烯納米組裝體，當(dāng)存在有待測物Mucin-1時，組裝體的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，金納米粒子從組裝體上解離，進而引起組裝體手性信號的改變，從而實現(xiàn)對Mucin-1的超靈敏檢測；具體步驟如下：

（1）檢測傳感器的構(gòu)建：

a、金納米粒子上修飾Mucin-1適配體Mucin-1 aptamer：采用檸檬酸還原法合成的金納米粒子，將其離心濃縮后，重懸于超純水中，濃度為5nM；取100μL濃縮重懸后的金納米粒子，加入2μL 10μM巰基化的Mucin-1 aptamer，和終濃度為50mM的NaCl溶液中，37℃孵育過夜，得到偶聯(lián)了Mucin-1 aptamer的金納米粒子溶液，待用；

b、石墨烯偶聯(lián)Mucin-1適配體部分互補序列Mucin-1 CS：取破碎后的石墨烯用超純水稀釋使終濃度為0.1mg/ml；按EDC、NHS和石墨烯的摩爾比為1000︰1000︰1，加入EDC和NHS，在避光的情況下反應(yīng)2h；之后，用截留量30k的超濾管過濾，用pH為7.5、10mM的PB緩沖液重懸；向其中加入終濃度2μM的Mucin-1 CS，反應(yīng)3h，得到石墨烯- Mucin-1 CS溶液，待用；