[發明專利]一種基于數字PCR平臺的miRNA檢測質量控制試劑盒及其使用方法

有效

• 申請號: 201610831646.3
• 申請日: 2016-09-19
• 公開（公告）號: CN106399501B
• 公開（公告）日: 2019-08-09
• 發明（設計）人: 魏亮;盧俊;楊洪吉
• 申請（專利權）人: 成都仕康美生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/686
• 代理公司: 成都金英專利代理事務所(普通合伙) 51218
• 代理人: 裴娟

1.一種基于數字PCR平臺的miRNA檢測質量控制試劑盒，其特征在于，它包括人工合成的miRNA、反轉錄引物、檢測上引物、檢測下引物和DEPC水，所述人工合成的miRNA序列如SEQID No. 1所示，所述反轉錄引物序列如SEQ ID No. 2所示，所述檢測上引物序列如SEQ IDNo. 3所示，所述檢測下引物序列如SEQ ID No. 4所示。

2.如權利要求1所述的一種基于數字PCR平臺的miRNA檢測質量控制試劑盒，其特征在于，所述人工合成的miRNA濃度為3×10⁶ copies/μl，所述反轉錄引物的濃度為5μM，所述檢測上引物和檢測下引物的濃度為10μM，所述DEPC水的質量百分比濃度為1%。

3.如權利要求1或2所述的一種基于數字PCR平臺的miRNA檢測質量控制試劑盒，其特征在于，所述人工合成的miRNA體積為8μl，所述反轉錄引物、檢測上引物和檢測下引物的體積各為1μl，所述DEPC水的體積為1ml。

4.如權利要求1所述的一種基于數字PCR平臺的miRNA檢測質量控制試劑盒的使用方法，其特征在于，它包括以下步驟：

S1. 用DEPC水稀釋人工合成的miRNA至原濃度的1/10倍；

S2. 提取生物體體液的總miRNA為樣品，加入裂解液類buffer裂解樣品中RNA酶后，樣品中加入4μl稀釋后的人工合成的miRNA；

S3. 設定提取樣品中總miRNA最終溶解體積為A，配制對照樣品，具體步驟為：吸取4μl稀釋后的人工合成的miRNA溶于A-4μl體積的DEPC水中；

S4. 在反轉錄樣品中待檢測靶miRNA同時，單獨將樣品和對照樣品進行反轉錄人工合成的miRNA，每10μL反應體系中加入1μl反轉錄引物；

S5. 在數字PCR檢測樣品中待檢測靶miRNA同時，分別對樣品和對照樣品進行數字PCR染色法檢測人工合成的miRNA，反應體系中每20μl加入檢測上引物和檢測下引物各0.5μl；

S6. 設定樣品最終結果為X copies/μl，對照樣品最終結果為Y copies/μl，按下述結果進行判斷：

X/Y=0.8～1，表示本次實驗檢測的靶miRNA結果真實可靠；

X/Y＜0.8，表示本次實驗檢測的靶miRNA結果誤差大，重新提取miRNA；

X/Y＞1，表示對照樣品配制存在問題，重新配制后實驗。

5.如權利要求4所述的一種基于數字PCR平臺的miRNA檢測質量控制試劑盒的使用方法，其特征在于，步驟S3中所述A為10～60μl。