[發(fā)明專利]一種脂肪酶基因、載體、工程菌及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610822148.2
• 申請日: 2016-09-14
• 公開（公告）號: CN106591258B
• 公開（公告）日: 2019-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黎小軍
• 申請（專利權(quán)）人: 新余學(xué)院
• 主分類號: C12N9/20
• 分類號: C12N9/20;C12N15/55;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/00;C12R1/19
• 代理公司: 南昌大牛專利代理事務(wù)所(普通合伙) 36135
• 代理人: 喻莎

本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，公開了一種脂肪酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。將其其編碼基因與表達載體連接構(gòu)建得到含該基因的胞內(nèi)表達重組質(zhì)粒，再轉(zhuǎn)化至大腸桿菌菌株中，獲得重組大腸桿菌，可以利用重組大腸桿菌細胞為催化劑進行生物催化生產(chǎn)普瑞巴林關(guān)鍵手性中間體制備(3S)?2?羧乙基?3?氰基?5?甲基己酸。本發(fā)明獲得的脂肪酶對2?羧乙基?3?氰基?5?甲基己酸乙酯具有極高的對映選擇性，具有很好的工業(yè)應(yīng)用前景。

(一)技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種脂肪酶的基因、含有該基因的重組載體、該重組載體轉(zhuǎn)化得到的基因工程菌，本發(fā)明還涉及所述的脂肪酶在制備(35)-2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸中的應(yīng)用。

(二)背景技術(shù)

脂肪酶(lipase，EC 3.1.1.3)，系統(tǒng)名稱為三脂酰甘油酰基水解酶(triacylglycerol acylhydrolase)，是一類催化三酯酰甘油的酯鍵水解的酶。脂肪酶具有多種催化功能，除能催化酯水解，還具有催化酯合成、轉(zhuǎn)酯化、氨解、醇解等反應(yīng)，在食品、洗滌、飼料、制革、生物能源、油脂加工、有機合成和對映體拆分等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。脂肪酶催化的反應(yīng)除具有選擇性高、副反應(yīng)少，產(chǎn)物光學(xué)純度高等特點外，還具有催化反應(yīng)條件溫和、綠色環(huán)保等優(yōu)越性，這使得脂肪酶在光學(xué)純化合物特別是手性藥物的制備中具有獨特的優(yōu)勢。脂肪酶生物催化已成為重要的手性化學(xué)品合成、特別是手性藥物制備的重要技術(shù)手段。

脂肪酶廣泛存在于自然界中的各種生物體內(nèi)，其中來源于微生物的脂肪酶容易獲得、種類最多，且與動植物來源的脂肪酶相比，具有更廣的溫度和pH值適應(yīng)范圍，并且底物譜廣，催化選擇性高，因而微生物成為工業(yè)脂肪酶的重要來源。不同微生物來源的脂肪酶，通常具有不同的分子結(jié)構(gòu)和催化特性。如來源于嗜熱菌的熱穩(wěn)定脂肪酶，一般具有較強的溶劑穩(wěn)定性，具有很好的生物技術(shù)和工業(yè)應(yīng)用潛力。從嗜熱菌中獲得熱穩(wěn)定酶已成為學(xué)術(shù)界和工業(yè)界的研究熱點。部分嗜熱菌的脂肪酶基因已被克隆表達，并獲得產(chǎn)酶活力較高的基因工程菌，但是在對已有脂肪酶進行研究的同時，開發(fā)新的、具有應(yīng)用價值的微生物來源的脂肪酶是研究的熱點，具有重要意義。

(三)發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種脂肪酶、編碼該酶的基因、含有該基因的重組載體、該重組載體轉(zhuǎn)化得到的重組基因工程菌，及其在立體選擇性水解2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸乙酯制備普瑞巴林關(guān)鍵手性中間體(3S)-2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸中的應(yīng)用。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

本發(fā)明提供一種來源于嗜熱真菌Talaromyces dupontii ATCC16461的脂肪酶，所述脂肪酶的氨基酸序列為SEQ ID NO：2所示，其中1-22aa(MRSSLVLFFISAWTALARPVRR)為信號肽序列，其成熟肽由269aa組成。

所述SEQ ID NO：2所示氨基酸序列為：

任何對SEQ ID NO：2所示氨基酸序列中氨基酸進行缺失、插入或替換的處理獲得的多肽片段或其變體，只要其與SEQ ID NO：2所示氨基酸序列具有95％以上同源性，均屬于本發(fā)明的保護范圍。

本發(fā)明還提供一種編碼所述脂肪酶的基因，所述編碼基因的核苷酸序列為SEQ IDNO：1所示。