[發明專利]一種快速對光倒刺鲃不同群體進行分類的試劑盒

有效

• 申請號: 201610813117.0
• 申請日: 2016-09-09
• 公開（公告）號: CN106282365B
• 公開（公告）日: 2019-05-31
• 發明（設計）人: 舒琥;楊揚;岳磊;李強;藍召軍;谷平華
• 申請（專利權）人: 廣州大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發明屬于水產遺傳分類技術領域，具體地說，對光倒刺鲃不同群體進行分類的試劑盒。所述的試劑盒包括taq酶預混液、蒸餾水、引物，所述的引物包括試劑1、試劑2和試劑3，試劑1、試劑2和試劑3為分別含有4種長度不同的SSR引物的混合試劑，使用該試劑盒進行分類操作簡便，將數種產物長度不同的SSR進行混合，極大的減少了操作過程中的工作量，更為準確，使用SSR分子標記，分類快速，最快可在2小時內分類一批個體。

技術領域

本發明屬于水產遺傳分類技術領域，具體地說，對光倒刺鲃不同群體進行分類的試劑盒。

背景技術

光倒刺鲃（Spinibarbus hollandi）屬鯉形目，鯉科，鲃亞科，倒刺鲃屬。具有個體大、生長快、食性廣、耐低氧、抗病力強、易養殖等優點。分布于長江、錢塘江、閩江、九龍江、珠江、元江、臺灣島及海南島等諸水系。不同流域的光倒刺鲃長相相似，通過形態學分辨不同流域的光倒刺鲃較為費力且不準確。此試劑盒使用分子標記的的方法，快速簡便的對不同的光倒刺鲃群體進行分類。

串聯重復序列（SSR）是一種以特異引物PCR為基礎的分子標記技術，也稱為微衛星序列，是一類由幾個核苷酸為重復單位組成的長達幾十個核苷酸的串聯重復序列。通過電泳可充分顯示不同長度重復序列片段的多態性。SSR標記具有以下優點：1.數量豐富，覆蓋整個基因組，多態性高；2.具有多等位基因的特性，提供的遺傳信息量高；3.以孟德爾方式遺傳，呈共顯性。在光倒刺鲃的種群分類中引入該方法，并將多條長度不一的SSR產物相組合，以最快最簡潔的方法對光倒刺鲃的群體進行鑒定分類。

發明內容

本發明的目的在于解決上述問題，提供一種快速對光倒刺鲃不同群體進行分類的試劑盒，有效降低試驗的工作量，提高準確度。

本發明通過以下技術方案來實現上述目的：

一種快速對光倒刺鲃不同群體進行分類的試劑盒，所述的試劑盒包括taq酶預混液、蒸餾水、引物，所述的引物包括試劑1、試劑2和試劑3，試劑1、試劑2和試劑3為含有4對SSR引物的混合試劑，試劑1包括產物長度分別為109bp、150bp、202bp、273bp的SSR的引物，引物序列分別為CCTGTGAAATGATTCCATGC，CTTTGACGTAAAACCCCCAA；CGAGAGCATCTTCACTGCTG，TGGTTTAAAATAGACGCGGG；TCCTGTCCTGAAAAGTGCAT，GGTGTCTGTTGAGGCACTGA；AGTTGGGATGTGGCAGTAGG，TGAGTGCTT GTGTGTGAGCA；試劑2包括產物長度分別為104bp、141bp、213bp、278bp的SSR引物，引物序列分別為ATCCGCTTCATCTCCAACAT，GGTGCAGTGAGAGTGTTTGC；CGGGGCAGAACTAAGACAAA，TTTGCAATGTGCAATGTGTTT；TGACGTGGCCAAGTATGGTA，GTTCGAGTCTCGGTACTGGC；AATTCTTCTCCAAGGGCTCC，TCGGTTAGACCAGAGAAAGCA；試劑3包括產物長度分別為114bp、154bp、204bp、248bp的SSR引物，引物序列分別為AACGTGTGTCTCTGGCACTG，ATGCGCAGTTTGTCCTGTAA；GCATTGTTGCTCTGCATGAT，CCTCCTCTTGTGTGTGGGAT；TTTTAGCAACCCCAAAATGC，CGCAGAGTCTCTCTCAACCC；CAGAAGTCTCTGTGTGGCATTT，TAAAAGTGTGAGGCCAGCAA。

作為本發明的進一步優化方案，3種試劑中的引物序列均為5’→3’,正向引物在前，反向引物在后。

作為本發明的進一步優化方案，試劑1、試劑2和試劑3的濃度均為100μM/L，需要稀釋十倍用于實驗或者-20℃條件下保存。

作為本發明的進一步優化方案，試劑1、試劑2和試劑3中的引物試劑所需的退火溫度為51-62℃。