[發(fā)明專利]豬圓環(huán)病毒II型口服病毒樣顆粒疫苗及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610807435.6
• 申請日: 2016-09-07
• 公開（公告）號: CN106399138B
• 公開（公告）日: 2019-11-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 呂紅;段進(jìn)坤;周峻崗;余垚
• 申請（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N7/04;A61K39/12;A61P31/20;A61P13/12;A61P15/08;A61P17/00;C12R1/645
• 代理公司: 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

1.一種重組馬克斯克魯維酵母重組工程菌，其特征在于，由重組載體轉(zhuǎn)化馬克斯克魯維酵母營養(yǎng)缺陷型菌株所構(gòu)建，其中，所述重組載體通過將編碼豬圓環(huán)病毒II型衣殼蛋白的核苷酸插入到馬克斯克魯維酵母表達(dá)載體所構(gòu)建，其中，所述馬克斯克魯維酵母表達(dá)載體包括馬克斯克魯維酵母菊粉酶啟動子基因序列、馬克斯克魯維酵母菊粉酶終止子基因序列，所述馬克斯克魯維酵母表達(dá)載體的核苷酸序列為SEQ ID No.6。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組馬克斯克魯維酵母重組工程菌，其特征在于，所述豬圓環(huán)病毒II型衣殼蛋白氨基酸序列如SEQ ID No.1或2所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組馬克斯克魯維酵母重組工程菌，其特征在于，所述馬克斯克魯維酵母的營養(yǎng)缺陷型菌株為CGMCC No.10621。

4.一種豬圓環(huán)病毒II型病毒樣顆粒的制備方法，其特征在于，步驟包括：

權(quán)利要求1所述重組馬克斯克魯維酵母重組工程菌培養(yǎng)發(fā)酵，在細(xì)胞內(nèi)組裝成豬圓環(huán)病毒II型病毒樣顆粒；

收集培養(yǎng)發(fā)酵的菌，或者將收集的菌破碎。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，還包括如下構(gòu)建所述重組馬克斯克魯維酵母重組工程菌的步驟：

將編碼豬圓環(huán)病毒II型衣殼蛋白的核苷酸插入到馬克斯克魯維酵母表達(dá)載體，構(gòu)建重組載體，將所述重組載體轉(zhuǎn)化馬克斯克魯維酵母營養(yǎng)缺陷型菌株，構(gòu)建得到所述的重組馬克斯克魯維酵母重組工程菌。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，根據(jù)馬克斯克魯維酵母的密碼子偏好性，在保證編碼豬圓環(huán)病毒II型衣殼蛋白序列相同的條件下進(jìn)行密碼子優(yōu)化。

7.一種權(quán)利要求3所述重組馬克斯克魯維酵母重組工程菌、或由權(quán)利要求4所述方法制備的豬圓環(huán)病毒II型病毒樣顆粒的應(yīng)用，其特征在于，用于制備預(yù)防和/或治療豬圓環(huán)病毒II型病毒引發(fā)的疾病的藥物。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用選自用作口服疫苗、作為飼料添加劑、飲用水添加劑中的任意一種或幾種。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述豬圓環(huán)病毒II型病毒引發(fā)的疾病選自斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合癥、豬皮炎腎病綜合癥、仔豬先天性震顫和母豬繁殖障礙中的任意一種或幾種。

10.一種制備豬圓環(huán)病毒II型病毒樣顆粒口服疫苗的方法，其特征在于，步驟包括：

以權(quán)利要求4中所收集的培養(yǎng)發(fā)酵的菌體、或權(quán)利要求4中收集菌體步驟后破裂后獲得的病毒樣顆粒，作為活性成分或作為活性成分之一，制備豬圓環(huán)病毒II型病毒樣顆粒疫苗。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，收集菌體后，直接破壁，所得產(chǎn)物作為口服疫苗。

12.一種預(yù)防和/或治療豬圓環(huán)病毒II型病毒引發(fā)的疾病的口服藥物，其特征在于，包括按權(quán)利要求4所述方法制備的豬圓環(huán)病毒II型病毒樣顆粒。