[發明專利]一種取代度適宜的羧甲基茯苓多糖及其制備方法

在審

• 申請號: 201610803233.4
• 申請日: 2016-09-06
• 公開（公告）號: CN106995499A
• 公開（公告）日: 2017-08-01
• 發明（設計）人: 黃文;王益;劉瑩;周蜜;李慧
• 申請（專利權）人: 武漢潤歌生物科技有限公司
• 主分類號: C08B37/02
• 分類號: C08B37/02;A23L2/39;A23L2/52;A23L21/10;A23L33/125;A23L33/15;A23L33/16;A23L33/19;A21D13/80;A21D2/18
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技術領域

本發明屬于高分子多糖制備技術領域。具體涉及一種取代度適宜的羧甲基茯苓多糖（CMP）的制備方法，利用該方法制備的CMP可用于制藥、保健品、食品、化妝品和飼料等領域。

背景技術

茯苓是一種藥食兼用真菌，具有利水滲濕，健脾寧心等的功效，有著良好的藥用、食用及保健價值。茯苓含有多種化學成分，主要成分是占茯苓干重90%的茯苓多糖。其中只有1%茯苓多糖可以溶解于水中，現代醫學研究表明，水性茯苓多糖具有抗腫瘤、增強免疫的生物活性。其余的堿溶性茯苓多糖則不具有生物活性功能，大部分被當成藥渣棄去，造成嚴重浪費。

通過化學改性的方法，引入合適的離子基團能夠顯著改善天然多糖的水溶性，改變其在水溶液中的鏈構象，從而顯著提高天然多糖的生物活性。不同的取代基團、取代位置和取代度對多糖衍生物的活性有著重要影響。羧甲基茯苓多糖（CMP）是通過羧甲基化反應，在茯苓多糖分子中引入羧甲基，顯著增強了茯苓多糖水溶特性和生物學活性。現代藥理學研究表明，CMP具有較強的抗腫瘤活性、調節機體免疫功能，可廣泛用于惡性腫瘤放化療的輔助治療，顯著增強惡性腫瘤患者的免疫功能，能減輕癌癥患者放療、化療的毒副反應，并使患者的免疫功能得到改善，增強體質。

羧甲基茯苓多糖的制備技術已有許多文獻和專利報道，但現有制備技術仍然存在制備時間過長、制備產物活性不穩定以及顏色不理想等一系列問題，無法充分發揮茯苓多糖的資源優勢。許多研究者也試圖改善現有技術，如在申請號為201410603964.5的專利（一種羧甲基茯苓多糖的制備方法及其新用途）中提到，采用催化劑技術，通過向反應體系中添加用量為茯苓粉10~20%的催化劑，可以顯著提高茯苓多糖羧甲基化效率。但該方法不僅降低了制備產物的純度，而且大大增加了CMP食用安全隱患；在申請號為201210375000.0的專利（一種羧甲基茯苓多糖的制備方法）中提到，通過加入2~5%雙氧水溶液脫色2~24小時來改善反應產物的色澤。但該方法不僅增加了制備工序，延長制備時間，同時，使用雙氧水對CMP的活性造成損失；多糖衍生物活性高低于引入的離子基團、取代度、取代位置、水溶性和鏈的構象有關，CMP取代度越高，在水中的溶解度越大。在申請號為200610163425.X專利（高取代度羧甲基茯苓多糖及其制備方法和其應用）中提到，提高CMP的羧甲基取代度（D·S）使其不低于1.0，明顯提高CMP的溶解度。在本發明研究中發現，取代度過大或過小都影響CMP的生物活性，而CMP在取代度（D·S）為0.7時，既有良好的水溶性，又有優異和穩定的生物活性。

發明內容

本發明的旨在針對現有制備技術的缺陷，提供一種制備取代度適宜的羧甲基茯苓多糖的方法，以實現提高茯苓多糖羧甲基化效率，縮短反應時間，所獲得的反應產物的取代度適宜，水溶解性好，活性穩定，色澤更好等的目的。

本發明提供的技術方案是：

一種取代度適宜的羧甲基茯苓多糖制備新方法，先將干燥過的茯苓菌核進行粉碎過80或100目篩，得到粒度均勻的茯苓粉；以⁶⁰Co-γ為輻照源，對茯苓粉進行輻照；以輻照后的茯苓粉作為羧甲基化反應底物，加入乙醇溶液進行溶脹；溶脹后，加入氫氧化鈉，進行堿化反應，反應結束后，冷卻；然后，加入氯乙酸和過量的氫氧化鈉與茯苓全粉進行羧甲基化反應，得到取代度在0.7左右的羧甲基茯苓多糖。

具有工藝流程如圖1所示。

具體步驟是：輻照時，所述⁶⁰Co-γ為輻照源輻照劑量為9kGy~27kGy。

所述乙醇溶液濃度為85%，溶脹料液比為酒精溶液∶茯苓粉=5∶1或6∶1或7∶1。

堿化反應中所述的氫氧化鈉加入的量為茯苓粉質量的0.3～0.4倍；加入氫氧化鈉之后進行攪拌，堿化反應0.5~1h，反應溫度為40～60℃。反應結束后，應進行冷卻，冷卻至溫度10～30℃。

羧甲基化反應中所述氯乙酸的加入量為茯苓粉質量的0.8～1.2倍，使茯苓粉和氯乙酸在過量的氫氧化鈉下進行醚化反應3～4h，反應溫度為50～70℃，反應完畢后，用冰乙酸調至pH至5.0～6.0，用體積分數80～90%的乙醇洗滌3～5次，除去多余氯離子，并洗至白色或淡黃色，在50℃溫度條件下干燥。

本發明所述的取代度適宜的羧甲基茯苓多糖是通過上述生產工藝制備而成的。

本發明所述的取代度適宜的羧甲基茯苓多糖粉經小鼠急性毒性試驗證明是安全無毒性的。

此外，針對原有技術工藝缺陷，本發明進行如下改進：