[發(fā)明專利]抗人CD20人源化單克隆抗體MIL62、其制備方法及用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610791273.1
• 申請(qǐng)日: 2016-08-31
• 公開（公告）號(hào): CN107384932B
• 公開（公告）日: 2020-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李鋒;葉培;張伯彥;趙健;劉旭;謝波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京天廣實(shí)生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/13
• 分類號(hào): C12N15/13;C12N5/10;C07K16/28;A61K39/395;A61P35/00;A61P35/02;A61P37/02;A61P29/00;A61P19/02
• 代理公司: 中國(guó)貿(mào)促會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 11038
• 代理人: 劉海羅

本發(fā)明涉及一種抗人CD20人源化單克隆抗體，以及編碼所述抗人CD20人源化單克隆抗體的核酸分子。本發(fā)明還涉及所述抗人CD20人源化單克隆抗體的制備方法，所述核酸分子用于制備所述人源化單克隆抗體的用途，以及所述人源化單克隆抗體用于制備抗腫瘤、自身免疫疾病及炎癥的藥物的用途。與現(xiàn)有的抗人CD20人源化單克隆抗體Rituximab和GA101相比，本發(fā)明的抗人CD20人源化單克隆抗體具有增強(qiáng)的ADCC活性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種抗人CD20人源化單克隆抗體MIL62及編碼所述人源化單克隆抗體的核酸分子。本發(fā)明還涉及所述人源化單克隆抗體的制備方法，和所述核酸分子用于制備所述抗人CD20人源化單克隆抗體MIL62的用途，以及所述人源化單克隆抗體用于制備抗腫瘤、自身免疫疾病及炎癥的藥物的用途。

背景技術(shù)

白細(xì)胞分化抗原(CD)是指血細(xì)胞在分化、成熟過程中的細(xì)胞表面標(biāo)記。CD20表達(dá)于除漿細(xì)胞(分泌免疫球蛋白的B細(xì)胞)外的發(fā)育分化各階段的B細(xì)胞的表面，可能通過調(diào)節(jié)跨膜鈣離子流動(dòng)直接對(duì)B細(xì)胞起作用，在B細(xì)胞增殖和分化中起重要的調(diào)節(jié)作用。CD20抗原是一種B細(xì)胞分化抗原，僅位于前B細(xì)胞和成熟B細(xì)胞，它在95％以上的B細(xì)胞性淋巴瘤中表達(dá)，而在造血干細(xì)胞、血漿細(xì)胞和其他正常組織中不表達(dá)。

正是由于CD20的重要性，羅氏公司成功研發(fā)的以CD20為抗原目標(biāo)的單抗藥物Rituximab(利妥昔單抗，商品名Rituxan，Mabthera)是FDA批準(zhǔn)的第一個(gè)治療淋巴癌的嵌合單抗藥物，自1997年在美國(guó)獲準(zhǔn)上市以來一直位列全球暢銷藥前列，該藥物用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和B細(xì)胞型非霍奇金淋巴瘤。

本發(fā)明的目的是通過密碼子優(yōu)化和基因敲除技術(shù)獲得編碼抗人CD20人源化單克隆抗體的核酸分子及該抗體，以期通過去除巖藻糖糖基化增強(qiáng)抗體的ADCC(抗體依賴的細(xì)胞毒性)活性和降低CDC(補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性)活性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明通過密碼子優(yōu)化和基因敲除技術(shù)獲得編碼抗人CD20人源化單克隆抗體MIL62的核酸分子，通過基因構(gòu)建、分子克隆、轉(zhuǎn)染細(xì)胞、細(xì)胞株篩選、發(fā)酵培養(yǎng)、分離純化等手段獲得巖藻糖完全敲除的重組抗人CD20人源化單克隆抗體MIL62，進(jìn)一步通過分析鑒定及活性檢測(cè)確定該抗體更高的ADCC(抗體依賴的細(xì)胞毒性)活性和降低的CDC(補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性)活性。具體地，本發(fā)明包括以下幾個(gè)方面：

本發(fā)明第一方面涉及編碼抗人CD20人源化單克隆抗體MIL62的核酸分子，抗體MIL62的輕鏈核苷酸序列為：