[發(fā)明專利]一株高效降解嘔吐毒素的伊格爾茲氏菌Eggerthellasp．DII?9

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610785205.4
• 申請(qǐng)日: 2016-08-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106119177B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄧詣群;高小娟;母培強(qiáng);陳慶梅;文繼開(kāi)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A23L5/20;C12R1/01
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司44102
• 代理人: 林麗明

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物篩選及霉菌毒素降解技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，涉及一株高效降解嘔吐毒素的伊格爾茲氏菌Eggerthella sp. D II-9。

背景技術(shù)

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（Deoxynivalenol，DON），因能引起豬、狗、貓等動(dòng)物嘔吐反應(yīng)，故又稱為嘔吐毒素（vomitoxin）。DON污染糧谷的情況非常普遍，許多糧谷類都受到嚴(yán)重污染，如小麥、燕麥、大豆和黑麥等。中國(guó)、巴西、美國(guó)、阿根廷和南非等世界各地均有DON污染糧食的報(bào)導(dǎo)。2016年在中國(guó)山東調(diào)查了359份面粉樣品的霉菌毒素污染狀況，發(fā)現(xiàn)DON的檢出率最高，達(dá)到97.2%，平均污染濃度為86.7 μg/kg（Li et al., 2016）。不僅在糧谷作物中DON的污染嚴(yán)重，在飼料原料及全價(jià)配合飼料中的污染也很普遍。2012~2014年，隨機(jī)收集的我國(guó)中部地區(qū)飼料及配合飼料190份，DON的陽(yáng)性率為77.4%（Liu et al., 2016）。DON是一種毒性很強(qiáng)的霉菌毒素，可使人和動(dòng)物體重減輕，腹瀉，擾亂腸道系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)、并影響內(nèi)分泌系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)等（Tang et al., 2015），并能通過(guò)血液循環(huán)到達(dá)血腦屏障，從而造成潛在的神經(jīng)毒性（Behrens et al., 2015）。DON抑制蛋白質(zhì)的合成、細(xì)胞的增殖，從而可能導(dǎo)致基因毒性、細(xì)胞毒性等（Lautert et al., 2014）。豬是對(duì)DON最敏感的動(dòng)物，當(dāng)飼料中DON濃度達(dá)到1~2 ppm就會(huì)使采食量降低（Prelusky et al., 1994）。

DON是單端孢霉烯族化合物B類，其化學(xué)名為12，13-環(huán)氧-3α，7α，15-三羥基單端孢霉-9-烯-8酮，分子式為C₁₅H₂₀O₆。DON具熱穩(wěn)定性，能耐170～350℃的高溫，并耐酸堿。目前，DON的脫毒方法主要包括物理、化學(xué)、生物方法三類。物理脫毒法主要有活性碳及蒙脫石吸附（Abdel-Wahhab et al., 2015）、漂洗研磨、高溫處理等；化學(xué)脫毒方法包括酸、堿、氧化劑等的處理。但是，不管是物理的還是化學(xué)的方法，都有可能帶來(lái)二次污染、影響口感、降低糧食的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值等。相對(duì)傳統(tǒng)的物理和化學(xué)方法，生物方法越來(lái)越受到研究者的重視。生物脫毒即生物降解是通過(guò)微生物或者酶將有毒的物質(zhì)轉(zhuǎn)化為低毒甚至無(wú)毒的代謝產(chǎn)物（Awad et al., 2010）。DON的主要毒性基團(tuán)是C12、13的環(huán)氧基團(tuán)，研究表明其脫環(huán)氧產(chǎn)物DOM-1的毒性只相當(dāng)于DON原藥的1/55（Sundstol et al., 2004），是公認(rèn)的一種解毒途徑。

國(guó)外雖有具DON脫環(huán)氧代謝能力的微生物報(bào)道，但和本發(fā)明所述的伊格爾茲氏菌Eggerthella sp. D II-9屬于不同科，有很大的區(qū)別，且均被注冊(cè)專利。國(guó)內(nèi)尚無(wú)DON脫環(huán)氧代謝微生物的報(bào)道。因此，分離具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的 DON脫環(huán)氧代謝微生物對(duì)于我國(guó)研究開(kāi)發(fā)DON的生物脫毒劑及其在飼料生產(chǎn)和食品加工上的應(yīng)用具有十分重要的作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一株具備高效嘔吐毒素（Dexoynivaneol, DON）脫環(huán)氧代謝能力的伊格爾茲氏菌Eggerthella sp. D II-9。

本發(fā)明的另一目的是提供一種高效降解嘔吐毒素的微生物制劑。

本發(fā)明上述目的通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一株高效降解嘔吐毒素的伊格爾茲氏菌Eggerthella sp. D II-9，屬于革蘭氏陽(yáng)性菌，大小為0.2～0.3μm×0.7～1.0μm，呈細(xì)桿狀，無(wú)鞭毛。

該菌株已于2016年6月23日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，其保藏編號(hào)為GDMCC NO：60049。

該菌株是從雞腸道微生物中分離篩選得到的，具體的分離篩選方法包括抗生素篩選、梯度稀釋篩選、96孔板篩選、比較宏基因組學(xué)、培養(yǎng)條件優(yōu)化、電鏡觀察和16S rDNA鑒定等。

該菌株能夠高效地將DON完全降解成脫環(huán)氧嘔吐毒素（Deepoxideoxinivalenol, DOM-1）。 該菌株在體外最適培養(yǎng)條件下，100～1000 CFU接種到200μl 體系，24～48 h內(nèi)可以將DON完全轉(zhuǎn)化為DOM-1。而且，該菌株對(duì)DON降解活性的維持不依賴于DON的持續(xù)存在，在不含DON的培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)多代不會(huì)導(dǎo)致活性降低或丟失。

優(yōu)選地，該菌株在改良營(yíng)養(yǎng)肉湯NB 培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，所述改良營(yíng)養(yǎng)肉湯NB 培養(yǎng)基的配方為：營(yíng)養(yǎng)肉湯NB 15～20g/L、L-Arg 0.5～1.5g/L。