[發明專利]一種建庫方法及SNP分型方法

有效

• 申請號: 201610773096.4
• 申請日: 2016-08-30
• 公開（公告）號: CN108300764B
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發明（設計）人: 盛司潼;黃思強
• 申請（專利權）人: 武漢康昕瑞基因健康科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12Q1/6869;C40B50/06
• 代理公司: 北京遠智匯知識產權代理有限公司 11659
• 代理人: 張海英

1.一種建庫方法，其特征在于，包括以下步驟：

A、利用特異性擴增引物組對含待測SNP位點的待測序樣本進行PCR擴增，得到擴增產物；所述特異性擴增引物組中的至少一種擴增引物上含有IIS型限制性內切酶識別序列，所述擴增產物上含有IIS型限制性內切酶切割位點，所述IIS型限制性內切酶切割位點與所述待測SNP位點之間的距離為1至5個堿基；

B、采用IIS型限制性內切酶對擴增產物進行酶切，得到含有待測SNP位點的第一核酸片段，且所述第一核酸片段上經酶切形成第一末端；

C、在連接酶作用下，所述第一核酸片段在第一末端處連接測序接頭，得到文庫分子；

所述含有IIS型限制性內切酶識別序列的特異性擴增引物上還含有U，所述U和所述待測SNP位點在擴增產物上的位置分別位于所述IIS型限制性內切酶切割位點的兩側；所述步驟B結束后，還包括向反應體系中加入USER酶的步驟；

所述含有IIS型限制性內切酶識別序列的特異性擴增引物的5’端經過磷酸修飾，所述經磷酸修飾的5’端和所述待測SNP位點在擴增產物上的位置分別位于所述IIS型限制性內切酶切割位點的兩側；所述步驟B結束后，還包括向反應體系中加入λ核酸外切酶的步驟；

所述測序接頭上含有測序引物結合位點，所述測序引物結合位點位于所述測序接頭的第二末端處，所述第二末端用于與所述第一末端連接；

所述第一末端為粘性末端；所述第二末端為與第一末端完全互補配對的粘性末端。

2.根據權利要求1所述的建庫方法，其特征在于，所述文庫分子的末端上含有生物素標記，其被預先固定在含鏈霉親和素或親和素標記的磁珠上。

3.一種SNP分型方法，其特征在于，包括對按權利要求1至2中任一項所述的建庫方法制得的文庫分子進行測序的步驟。

4.根據權利要求3所述的SNP分型方法，其特征在于，所述方法還包括將文庫分子可尋址的固定在固相載體上的步驟。

5.根據權利要求3所述的SNP分型方法，其特征在于，當檢測的待測序樣本有多個時，根據待測序樣本的不同分別進行建庫，獲得多種文庫分子，再將多種文庫分子混合后進行測序。

6.根據權利要求5所述的SNP分型方法，其特征在于，所述多種文庫分子上分別含有不同的標簽序列。