[發明專利]一種建庫方法及SNP分型方法

在審

• 申請號: 201610772852.1
• 申請日: 2016-08-30
• 公開（公告）號: CN108300773A
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發明（設計）人: 盛司潼;黃思強
• 申請（專利權）人: 廣州康昕瑞基因健康科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869;C12Q1/6806;C40B50/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種建庫方法，其特征在于，包括以下步驟：

A、PCR擴增含待測SNP位點的待測序樣本，得到擴增產物；

B、在所述擴增產物上連接接頭一，得到含有IIS型限制性內切酶識別序列以及IIS型限制性內切酶切割位點的連接產物，所述接頭一為雙鏈核酸分子，所述IIS型限制性內切酶切割位點與所述待測SNP位點之間的距離為0至5個堿基；

C、采用IIS型限制性內切酶對連接產物進行酶切，得到含有待測SNP位點和接頭一的第一核酸片段，且所述第一核酸片段上經酶切形成第一末端；

D、在第一核酸片段的第一末端處連接接頭二，得到文庫分子，所述接頭二為含有測序引物結合位點的雙鏈核酸分子。

2.根據權利要求1所述的建庫方法，其特征在于，所述IIS型限制性內切酶識別序列位于所述PCR擴增引物組中的至少一種擴增引物上，并通過PCR擴增引入至連接產物上。

3.根據權利要求1所述的建庫方法，其特征在于，所述IIS型限制性內切酶識別序列位于所述接頭一上，并通過連接反應引入至連接產物上。

4.根據權利要求1所述的建庫方法，其特征在于，所述PCR擴增所用的引物組中，有至少一種擴增引物上含有可斷裂位點或可切除序列，所述步驟B包括以下步驟：

B1.利用斷裂劑切割所述擴增產物，所述斷裂劑用于對擴增產物中的可斷裂位點或可切除序列進行特異性切割，形成第二末端；

B2.在所述擴增產物的第二末端處連接接頭一，得到含有IIS型限制性內切酶識別序列以及IIS型限制性內切酶切割位點的連接產物，所述接頭一為雙鏈核酸分子，所述IIS型限制性內切酶切割位點與所述待測SNP位點之間的距離為0至5個堿基。

5.一種SNP分型方法，其特征在于，包括對按權利要求1至6中任一項所述的建庫方法制得的文庫分子進行測序的步驟。

6.根據權利要求5所述的SNP分型方法，其特征在于，所述方法還包括將文庫分子可尋址的固定在固相載體上的步驟。

7.根據權利要求5所述的SNP分型方法，其特征在于，當檢測的待檢測序樣本有多個時，根據待測序樣本的不同分別進行建庫，獲得多種文庫分子，再將多種文庫分子混合后進行測序。

8.一種用于檢測多種SNP位點突變的試劑盒，所述試劑盒包括擴增引物組和/或接頭一；所述擴增引物組用于對所述多種SNP位點中的至少一種SNP位點進行特異性擴增，所述接頭一為雙鏈核酸分子，用于與含待測SNP位點的待測序樣本的擴增產物連接；其特征在于，所述擴增引物組中的至少一種擴增引物上或接頭一上含有IIS型限制性內切酶識別序列，使得產生的IIS型限制性內切酶切割位點與待測SNP位點之間的距離為0至5個堿基。