[發明專利]白血病疾病模型及其構建方法

在審

• 申請號: 201610772225.8
• 申請日: 2016-08-30
• 公開（公告）號: CN107773573A
• 公開（公告）日: 2018-03-09
• 發明（設計）人: 井多輝
• 申請（專利權）人: 張超;井多輝
• 主分類號: A61K35/15
• 分類號: A61K35/15;A61N5/10;A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 上海巔石知識產權代理事務所(普通合伙)31309
• 代理人: 張琤

技術領域

本申請涉及疾病模型的構建，特別是白血病疾病模型及其構建方法。

背景技術

白血病是一種造血系統惡性增殖性疾病，通常指因白血病細胞大量增殖、累積所引起的一類疾病。由于白血病分型和預后分層的復雜性，所以為了獲得更好的治療效力，對白血病的研究勢在必行。然而，體外培養的白血病細胞的生物學特征與體內的白血病細胞生物學特征通常存在一定的差異，且在人體上進行實驗會導致極高的成本和風險，所以，其對應的動物模型是對白血病深入研究的重要環節。

小鼠是白血病研究中常用的理想動物模型，人類血液系統的髓系、淋巴系等惡性腫瘤均可獲得相應的小鼠模型，但是現有的人源化小鼠模型依然存在構建成功率低、臨床相關性不高等缺陷。

發明內容

本申請提供了白血病疾病模型、其構建方法以及通過該模型對候選藥物效力進行評估的方法和系統。本申請所提供的疾病模型構建方法直接建立患者來源的移植瘤疾病模型，具有很高的成功率。此外，根據本申請的方法建立的疾病模型具有很高的臨床相關性。

一方面，本申請提供了制備白血病人源化疾病模型的方法，所述方法包括：a)將來自白血病患者的骨髓樣本制備為細胞懸液，并使用單核細胞分離液來對所述細胞懸液進行離心分離；b)獲取包含白血病細胞的細胞層并制備白血病細胞懸液；c)判斷所述白血病是否為T細胞型白血病；對于非T細胞型白血病，去除由b)獲得的所述白血病細胞懸液中的T細胞，得到待接種的白血病細胞懸液，并使所述待接種的白血病細胞懸液中白血病細胞的終密度為2x10⁷/ml至5x10⁷/ml；對于T細胞型白血病，從由b)獲得的所述白血病細胞懸液制備待接種的白血病細胞懸液，其中白血病細胞的終密度為2x10⁷/ml至5x10⁷/ml；d)根據所述患者的白血病類型選擇適當的免疫缺陷型小鼠，并對所述免疫缺陷型小鼠進行放射性處理；以及e)將由c)獲得的所述待接種的白血病細胞懸液注射接種到d)所述經放射性處理的免疫缺陷型小鼠中。

在某些實施方式中，所述患者骨髓樣本中白血病細胞的含量為至少90％。

在某些實施方式中，所述單核細胞分離液為Ficoll，且所述離心分離為密度梯度離心分離。

在某些實施方式中，使用RPMI細胞培養基制備白血病細胞懸液。

在某些實施方式中，被去除的所述T細胞為CD3陽性T細胞。例如，可通過使用包含CD3抗體的磁珠來去除所述CD3陽性T細胞。在某些實施方式中，可使用高磁場來去除所述CD3陽性T細胞。

在某些實施方式中，所述白血病類型為急性淋巴細胞性白血病，且所述免疫缺陷型小鼠為NSG小鼠。對于該NSG小鼠，所述放射性處理為X射線輻射，且輻射劑量為200cGy至300cGy。

在某些實施方式中，所述白血病類型為急性髓性白血病，且所述免疫缺陷型小鼠為MISTRG小鼠。對于該MISTRG小鼠，所述放射性處理為X射線輻射，且輻射劑量為550cGy至650cGy。

在某些實施方式中，在注射所述白血病細胞懸液之前的12-24小時內對所述免疫缺陷型小鼠進行所述放射性處理。

在某些實施方式中，所述免疫缺陷型小鼠的年齡為5-7周。

在某些實施方式中，在注射接種所述基本不含T細胞的白血病細胞懸液之前對所述免疫缺陷型小鼠進行紅外燈照射及加熱。

在某些實施方式中，所述方法還包括監測來自所述患者的白血病細胞在所述小鼠體內的生長情況。例如，可通過監測經注射接種的所述小鼠外周血中huCD45⁺、huCD19⁺、huCD3⁺、和/或huCD33⁺細胞的比例來監測來自所述患者的白血病細胞在所述小鼠體內的生長情況。