[發明專利]用于封閉生物磁珠的方法

有效

• 申請號: 201610770444.2
• 申請日: 2016-08-30
• 公開（公告）號: CN106198962B
• 公開（公告）日: 2018-01-30
• 發明（設計）人: 林夢杰;蔡云瑤;許芹萍;田君喜
• 申請（專利權）人: 邁克生物股份有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

發明領域

本發明一般性地涉及醫療診斷、生物樣品檢測、食品安全檢測等領域，更具體地涉及用于封閉磁珠的方法、封閉液、以及相關的應用。

發明背景

磁珠是醫療診斷和生物檢測等領域常用的原料。磁珠，又稱生物磁珠，是指具有細小粒徑的超順磁微球。它們在磁場中能夠迅速聚集，離開磁場后又能夠均勻分散。它們一般具有合適的且差別較小的粒徑，保證了足夠強的磁響應性又不會沉降。生物磁珠通常具有豐富的表面活性基團，以便可以和生化物質偶聯，并在外磁場的作用下實現與被待測樣品的分離。與傳統的分離方法相比，把磁珠用于生化樣品復雜組分的的分離，能夠實現分離和富集的同時進行，有效地提高了分離速度和富集效率，同時也使分析檢測的靈敏度大大提升。通過在磁珠表面包被上特異性抗體、受體等，可以用于分離純化樣品中的靶體。磁珠已被廣泛應用于免疫分析、核酸分離提取、細胞分選、酶的固定、生物活性物質的分離、食品安全檢測等多個領域。

目前市場上有許多表面包被有親和素或鏈霉親和素的磁珠可以獲得。親和素和鏈霉親和素是由四個相同亞基組成的生物素結合蛋白質，每個亞基均有一個與生物素有高親和力的結合位點。借助于親和素或鏈霉親和素與生物素之間的高親和力結合特性，包被了親和素或鏈霉親和素的磁珠可以結合生物素化的蛋白、多肽、及非蛋白質(如各種DNA、RNA分子)等分子，進而從混合體系中快速分離生物素化成分，進行如免疫分析/檢測、親和純化、細胞分離、DNA探針分析和mRNA分離等多方面應用。

將抗原(或抗體)標記生物素后，通過生物素與磁珠上的鏈霉親和素反應，從而將抗原(或抗體)包被于磁珠，對于磁珠上未連接抗原(或抗體)的多余鏈霉親和素，通常通過引入生物素予以封閉。但是由于人體中可能出現抗生物素抗體，以及與磁珠表面其它結構產生反應的抗體，生物素作為小分子，并不能降低這些抗體與磁珠的連接，由此導致檢測結果的準確性降低。例如，在某些間接法檢測自身抗體的項目中，使用生物素封閉液來封閉磁珠在檢測健康獻血者的抗體濃度水平時可能出現信號異常升高，導致假陽性。

另外，CN201210180020.2、CN201510050450.6公開了以含有牛血清白蛋白(BSA)的封閉液對磁珠進行封閉的方法。但是這種BSA封閉液在通用性、檢測準確性等方面還存在很多問題。

因此，本領域急需一種新的封閉磁珠的方法，以便提高使用磁珠的生物檢測的準確率，尤其是降低健康獻血者自身抗體檢測的假陽性率。

發明內容

本發明的一個目標是提供一種封閉磁珠的方法和封閉液，其能有效地降低生物檢測過程中的假陽性、提高檢測準確率。

本發明的另一個目標是提供能有效地降低生物檢測過程中的假陽性、提高檢測準確率的檢測產品(例如試劑盒)和相關應用。

本發明的發明人出乎意料地發現，使用生物素化多聚賴氨酸代替生物素來封閉磁珠，能夠有效地降低使用磁珠進行的生物檢測的假陽性結果，尤其是對于源自于人的生物樣品。在一個優選實施方案中，本發明能夠有效地降低健康人類獻血者自身抗體檢測的假陽性率。

本發明一個方面涉及用于封閉生物磁珠的封閉液，所述封閉液包含生物素化多聚賴氨酸。

本發明另一個方面涉及一種試劑盒，所述試劑盒包含生物磁珠、生物素化誘餌和封閉液，其中所述封閉液包含生物素化多聚賴氨酸。

本發明另一個方面涉及一種封閉磁珠的方法，所述方法包括：

(1)制備含有生物素化多聚賴氨酸的封閉液；

(2)將生物磁珠與生物素化誘餌混勻；

(3)將步驟(2)中產物與步驟(1)中封閉液混勻。

以上步驟(1)、(2)可以任意順序進行，但是顯然步驟(3)只能在步驟(1)、(2)完成之后進行。

所述方法可以進一步包括步驟：

(4)洗滌步驟(3)中產物。

本發明的一個優選實施方式涉及一種封閉磁珠的方法，所述方法包括以下步驟：

(1a)用生物素標記多聚賴氨酸；

(1b)分離生物素化多聚賴氨酸并制備含生物素化多聚賴氨酸的封閉液；

(2)將磁珠與生物素化誘餌混勻；

(3)將步驟(2)中產物與步驟(1b)中產物混勻；

(4)洗滌步驟(3)中產物；

(5)加入適量緩沖液混勻。