[發明專利]一株牛睪丸傳代細胞株的建立及其應用

有效

• 申請號: 201610768868.5
• 申請日: 2016-08-30
• 公開（公告）號: CN106318899B
• 公開（公告）日: 2019-05-28
• 發明（設計）人: 薛青紅;馮忠武;馮忠澤;陳光華;印春生;顧進華;孫淼;張廣川;支海兵
• 申請（專利權）人: 中國獸醫藥品監察所
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N7/00;A61K39/12;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所(普通合伙) 11305
• 代理人: 鄭明

本發明涉及一株牛睪丸傳代細胞株的建立及其應用。該方法包括：(1)利用新鮮牛睪丸制備原代細胞并建立牛睪丸細胞系ZJS?1株；(2)采用單層細胞法培養牛睪丸傳代細胞生產豬瘟活疫苗；(3)采用懸浮細胞法培養牛睪丸細胞生產豬瘟活疫苗。本發明建立的牛睪丸細胞系用于豬瘟活疫苗生產具有生產工藝簡單且穩定、易操作，病毒含量高，批間差異小，質量易控，可顯著提高疫苗產量和質量。利用本發明生產的豬瘟活疫苗安全性好、免疫效力高，對豬瘟強毒攻擊具有完全的免疫保護作用。

技術領域

本發明涉及一株牛睪丸傳代細胞株的建立及其應用，屬于獸用生物制品領域。

背景技術

我國目前生產豬瘟兔化弱毒疫苗所用的細胞為牛睪丸原代細胞和豬腎細胞。為了改進豬瘟病毒的培養工藝，特自主研發建立牛睪丸傳代細胞株，又稱牛睪丸細胞系，在此基礎上建立基礎種子批和生產種子批，并對其進行系統檢定。

豬瘟活疫苗為我國自主研發的安全及效力均優良的活疫苗，在世界范圍內廣泛應用，用于預防豬瘟病毒的感染。原生產用細胞為牛睪丸原代細胞，需采集新鮮牛睪丸進行制備，近年來隨著牛病疫情的日趨復雜，采集新鮮牛睪丸制備生產用細胞存在外源病毒、細菌及支原體污染的風險，豬腎細胞作為生產用細胞是在牛睪丸原代細胞基礎上的一個進步，作為豬源細胞，豬源的其他病毒也更容易適應該細胞，并在細胞上增殖，導致豬源病毒污染。這些外源因子的污染對活疫苗的安全性和效力構成嚴重威脅，對使用動物及環境可能造成巨大的損失。

發明內容

本發明的目的在于改進現有技術存在的不足之處，提供一種用牛睪丸傳代細胞生產豬瘟活疫苗的方法。該方法具有生產工藝簡單且穩定、易操作，病毒含量高，批間差異小，質量易控，可顯著提高疫苗產量和質量，在轉瓶細胞生產線和懸浮細胞生產線均可進行生產。利用本發明生產的豬瘟活疫苗安全性好、免疫效力高，對豬瘟強毒攻擊具有完全的免疫保護作用。

本發明的技術方案

1.一株牛睪丸傳代細胞株的建立，其特征在于該細胞系源自由新鮮牛睪丸制備的原代細胞，經傳代后獲得一株既適用于轉瓶單層細胞培養，又適用于細胞懸浮培養工藝，且仍保持了對豬瘟病毒高度敏感性的牛睪丸傳代細胞株，該株傳代細胞株被命名為牛睪丸細胞系(Bovine testis cell line)ZJS-1株，已于2016年8月23日送交北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為CGMCC No.12699。

2.權利要求1所述一株牛睪丸傳代細胞株的應用，其特征在于該株牛睪丸細胞采用單層細胞培養法和豬瘟病毒兔化弱毒株CVCC No.AV1412用于豬瘟活疫苗的制備。

3.如權利要求2所述一株牛睪丸傳代細胞株的應用，其特征在于該株牛睪丸細胞采用細胞懸浮培養法和豬瘟病毒兔化弱毒株CVCC No.AV1412用于豬瘟活疫苗的制備。

4.如權利要求2、3所述一株牛睪丸傳代細胞株的應用，其特征在于其中的豬瘟病毒兔化弱毒株CVCC No.AV1412是豬瘟病毒的脾淋毒接種良好單層的牛睪丸細胞或懸浮培養的牛睪丸細胞，加入3.5％血清維持液后置培養箱中培養，每日觀察細胞狀態，4～5日后收獲病毒，按此方法繼續傳代病毒，取二收、三收細胞培養毒液作為生產用毒種。

本發明具體實施方式

1.牛睪丸傳代細胞系的建立