[發明專利]一種七葉皂苷B的制備方法有效

申請號：	201610763026.0	申請日：	2016-08-30
公開（公告）號：	CN106366154B	公開（公告）日：	2017-11-10
發明（設計）人：	石召華;關小羽;付強強;陳書涵;李群;張曉存	申請（專利權）人：	武漢愛民制藥股份有限公司
主分類號：	C07J63/00	分類號：	C07J63/00;A61P29/00;A61P7/10
代理公司：	武漢開元知識產權代理有限公司42104	代理人：	徐紹新
地址：	436070 湖北省***	國省代碼：	湖北;42
權利要求書：	查看更多	說明書：	查看更多
摘要：
搜索關鍵詞：	一種皂苷制備方法
鉆瓜網技術展會專利詞庫專利權人專利榜在售專利公布日期熱門專利

【說明書】：

技術領域

本發明屬于制藥領域，具體涉及一種七葉皂苷B的制備方法。

背景技術

七葉皂苷又稱七葉皂苷酸，為從七葉樹科屬植物種子提取得到的總皂苷、β-七葉皂苷或異七葉皂苷等的總稱，屬于三萜皂苷類。七葉皂苷的水溶解度較差，為增加其溶解度，常將其制成鈉鹽。七葉皂苷中含有很多種皂苷化合物，我國國家標準按液相出峰前后，依次命名為七葉皂苷A、七葉皂苷B、七葉皂苷C和七葉皂苷D。他們互為同分異構體(見附圖1)，目前用于臨床上的七葉皂苷鈉是由七葉皂苷A、七葉皂苷B、七葉皂苷C和七葉皂苷D以及其它成分組成的鈉鹽混合物。

七葉皂苷鈉長期使用過程中發現藥物對肌肉和粘膜具有強刺激作用，患者易出現靜脈炎等副作用。此外，部分皂苷類成分具有溶血作用。由于七葉皂苷鈉組合物的組分較多，七葉皂苷鈉中雜質的定性和定量控制幾乎無法實現。這種不可控性會導致七葉皂苷鈉產品的質量的均一性和安全性難以得到保證，特別是血管刺激性等不良反應難以掌控。因此，對七葉皂苷的各單體的分離、藥理活性和毒理性質的研究并篩選出最適合臨床用藥的更優單體顯得尤為重要。

藥理實驗研究表明，與七葉皂苷鈉組合物相比，七葉皂苷單體B具有更優的抗炎、抗水腫藥理活性和更低的肌肉和粘膜刺激性。此外，高純度的七葉皂苷單體B可解決目前七葉皂苷鈉產品質量的均一性和安全性難以得到保證，肌肉和血管刺激性等不良反應難以掌控等問題。因此，七葉皂苷單體B的制備和開發具有重大的臨床意義。

現有技術中，提取七葉皂苷單體主要是將提取物通過柱層析、離子交換樹脂或者大孔吸附樹脂等方法來得到粗品，然后進一步重結晶純化得到。CN102746363公開了一種高純度七葉皂苷單體B原料藥、其制備方法以及醫療用途。該方法將七葉總皂苷粗品經反相硅膠柱層析分離得到七葉皂苷單體B洗脫液，然后將七葉皂苷單體B洗脫液濃縮、析晶可得到純度較高的七葉皂苷單體B。但是我們在試驗中發現，將七葉皂苷單體B洗脫液濃縮后能成功析出晶體的前提條件是：濃縮液中七葉皂苷單體B單體需要相當高的濃度，濃度至少為80％。然而由于七葉皂苷A和七葉皂苷單體B結構極其類似，它們互為順反異構體，分離難度非常大，通過實驗證明，反相硅膠柱層析將七葉皂苷單體A和七葉皂苷單體B分離開幾乎不能實現，通過大幅度延長分離時間和大量使用洗脫溶劑才能夠勉強得到極其少量的七葉皂苷單體B。因此該工藝路線費時、費力、溶劑使用量大、七葉皂苷B單體收率低，難以用于工業化生產。

發明內容

本發明的目的是提供一種高純度、高收率的七葉皂苷B的專屬性制備方法。該方法設備要求低、純化費用低、毒性小、環境污染少，適合工業化生產。

本發明提供的七葉皂苷B制備方法包括以下步驟：

1)以娑羅子為原料，用乙醇提取，收集提取液并濃縮；

2)將步驟1)得到的濃縮液調節pH至2～3，然后用水飽和的正丁醇萃取，分離有機層并濃縮；

3)將步驟2)得到的濃縮液加入到2～5倍體積的丙酮/甲基叔丁基醚混合溶液中，攪拌下加熱回流，然后冷卻析晶并干燥；

4)將干燥后的晶體溶解于熱水中，然后再次冷卻析晶并干燥；

5)將二次析晶后的固體溶解到有機溶劑中，然后再向有機溶劑中加入占二次析晶后的固體重量的10-20％的L-脯氨酸，加熱回流10～60min后再冷卻到40-50℃，此時加入少量七葉皂苷B作為晶種，繼續攪拌冷卻至0-20℃析晶，直到白色晶體不再析出，抽濾或離心，將固體烘干，即得七葉皂苷B。

優選地，步驟(1)中的乙醇為質量濃度為30-70％的乙醇水溶液。

優選地，步驟(3)中的丙酮/甲基叔丁基醚混合溶液中，丙酮與甲基叔丁基醚的體積比為2-8∶1。

優選地，步驟(5)中的有機溶劑為乙醇/正己烷混合溶劑，所述乙醇與正己烷的體積比為10-30∶1。

優選地，步驟(5)中，所述L-脯氨酸占二次析晶后的固體重量的15％。