[發明專利]一種茶條槭組織培養快速繁殖的方法

有效

• 申請號: 201610759194.2
• 申請日: 2016-08-30
• 公開（公告）號: CN106305427B
• 公開（公告）日: 2018-04-10
• 發明（設計）人: 楊蘭芳;張國禹;黃桂云;邱利文;吳笛;吳錦華;張海波;馬曉波;汪磊;胡梅香;李翩翩
• 申請（專利權）人: 長江三峽生態園林有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 宜昌市三峽專利事務所42103
• 代理人: 蔣悅

技術領域

本發明涉及茶條槭組織培養快速繁殖的實用技術。

背景技術

茶條槭為槭樹科槭屬落葉大灌木或小喬木，葉、果供觀賞，葉型美麗。秋季葉色紅艷，特別引人注目；夏季剛剛結出的雙翅果呈粉紅色，十分秀氣、別致，是北方優良的觀賞綠化樹種。此外，其木材可做細木；嫩葉經加工可代茶用，具有生津止渴、退熱明目等功效，還可提取大量的沒食子酸(Gallic acid，3，4，5－三羥基苯甲酸)。沒食子酸又稱倍酸，五倍子酸，應用范圍很廣，主要用于藥物、染料、墨水制造，也用做食品抗氧劑、防腐劑、金屬提取劑、紫外線吸收劑、消毒劑、止血收斂劑、顯影劑、化學試劑、泥漿流化劑和葡萄生長劑等。研究表明，以沒食子酸為原料制成的藥物可使腫瘤細胞的生長抑制或凋亡，還可作為抗氧劑，具有較強的抗氧化作用，在國際醫學上，以沒食子酸為原料現已合成抗感染藥品如四氧普林(TXP)、溴莫普林(BOP)和美替普林(MTP)；腦復清(Exifone),用于治療老年意識障礙；聯苯雙脂，用于治療慢性肝炎；克冠卓、憂心平、心痛平，用于心絞痛、心衰、心肌梗塞恢復期等；通牌酯，用于治療腦血栓；Troxipide，用于治療胃潰瘍；克冠酸,用于治療心肌梗塞；沒食子酸銻鈉,用于治療血吸蟲；鞣花酸，用于防癌和抗癌。隨著科技發展及外貿不斷擴大,需求量將會越來越大。但目前茶條槭未見有天然優良種群,多為鑲嵌零散分布,加之掠奪性采收,已處于漸危狀。

目前，茶條槭的繁殖技術主要以播種育苗為主，但這些方式都存在以下不足之處：播種育苗技術出苗率低、不整齊、且易變異，對保存母株的優良性狀有一定影響，成苗周期長，出苗受季節限制，如要大批量出苗，需大量人力、物力及土地資源，生產成本高。綜上所述，尋找方法便捷，可批量出苗，生產成本低的茶條槭組培快繁方式，推動產業化生產極具必要性。

在2007年東北林業大學李海艷的碩士論文中曾提到采用種子為外植體建立茶條槭的組織培養再生體系；2007年甘肅農業大學李巖巖在碩士畢業論文中提到以實生苗莖段為外植體建立組培快繁體系；2008年東北林業大學生命科學學院董杰等以茶條槭子葉為外植體組培獲得沒食子酸。以上幾項研究都是以提取茶條槭沒食子酸為目的開展，在遺傳性狀穩定方面沒有進行系統的研究，因此其園林價值尚未開發利用。

發明內容

本發明通過篩選母株的優良性狀，采用莖段誘導不定芽再生和成熟種子胚培養誘導植株再生的方法，克服了現有技術中無菌苗褐化、增殖系數低和培養周期長的特點，提供了一種培養簡單，繁殖系數高，再生周期短，可持續獲得再生植株的方法，同時降低成本，可用于苗木產業化生產。

茶條槭組織培養快速繁殖的實用方法

外植體的選擇：對茶條槭進行為期兩年的物候期觀察，詳細記載每株苗木的萌芽期、花期、果期、翅果顏色、紅葉期、落葉期、病蟲害情況，篩選出無病蟲害的茶條槭健壯植株；

莖段誘導萌發：取經過篩選的植株無病蟲害萌條，截取當年生萌條的第一個至第四個帶芽幼嫩莖段為實驗材料，除去葉片，切段進行常規消毒，消毒莖段切成1.5-2.0cm長，每段帶一對腋芽，再接種到啟動培養基中，培養12-14天，使每個腋芽誘導1-2個芽，葉色嫩綠，生長健壯的無菌苗；所述的啟動培養基為MS+6-BA0.5-1.0mg/L+NAA0.05-0.1mg/L+AC0.5-1.0g/L +PVP100 -200mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉4.5g/L，其培養環境條件為溫度23±2℃、濕度60±2%、光照12-14h/d、光強1500-1800lx的恒溫恒濕培養室內。

胚培養誘導萌發：取經過篩選的優良性狀茶條槭為母本，采用形態成熟種子，去掉果翅，用洗衣粉浸洗15分鐘，流水沖洗2小時，再在超菌工作臺進行消毒。消毒過程為：先用75%酒精滅菌1分鐘，倒出用無菌水清洗2次，再用0.1%升汞消毒30分鐘，倒出用無菌水清洗4次，第一次快速清洗，后三次每次清洗3分鐘，此方法可徹底清洗升汞殘留物，避免傷害種胚。將消毒好的種子，去除外種皮，接種到胚培養的培養基中，培養2周，胚根及子葉逐步產生，進而形成完整無菌苗；所述的胚培養的培養基為MS+GA₃1.0-3.0mg/L+AC0.5-1.0g/L+PVP 100-200mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉4.5g/L，其培養環境條件為溫度23±2℃、濕度60±2%、光照12-14h/d、光強1500-1800lx的恒溫恒濕培養室內。初次接種三天后，進行第一次轉接，其后20天轉接一次，培養基不變。該方法有效控制褐化，同時可通過轉管的方式，吸附種胚中抑制其萌發的抑制物質，促進胚萌發；