[發明專利]一種在大腸桿菌中制備基因工程IgG抗體的方法

有效

• 申請號: 201610755474.6
• 申請日: 2016-08-30
• 公開（公告）號: CN106244612B
• 公開（公告）日: 2018-02-06
• 發明（設計）人: 鄭曾杰;王榮智;陳志斌;陳玲玲;曾林茂;顧小松
• 申請（專利權）人: 廈門瑞百泰生物醫藥有限公司
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C07K16/00
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發明屬于抗體工程領域，具體涉及一種在大腸桿菌中制備基因工程IgG抗體的方法。

背景技術

自1975年單克隆抗體技術創立以來，由于可以不受限制經過細胞雜交和篩選分泌特異性強的單克隆抗體而被大批量生產，由于該抗體分子特異性強和親和力高的特點而深受人們的喜愛。然而，單克隆抗體也有許多問題，目前的單克隆抗體都是來自鼠源的，因而在人體治療和使用時會產生很強的HAMA反應。這一缺陷嚴重的限制了單克隆抗體的應用。通過細胞融合所篩選獲得的雜交瘤細胞株往往是不穩定的，很容易受到各種因素的影響而喪失抗體分泌能力，或發生所謂的返祖現象。除此以外，單克隆抗體制備技術非常費時費力。特別是在制備某些特定抗原時像小鼠這樣的哺乳動物不容易產生高親和力的抗體，從而不能對特殊抗原分子實現高靈敏度檢測。因此，在體外建立一種基于大腸桿菌制備基因工程IgG抗體的方法是非常有必要的！

基因工程IgG抗體是一種新型IgG抗體類型，該抗體分子能在大腸桿菌中高效表達，其與傳統的抗體分子具有相似的結構，仍保持了抗原的結合活性。然而，它的實際意義卻遠遠超過這一點。從構建的天然噬菌體抗體庫中淘選獲得抗體基因，使得我們能夠跨越動物免疫這一步驟，大大縮短了抗體獲得的時間。另外，雜交瘤技術存在的不穩定、產量低問題，可以通過這一技術將從天然噬菌體抗體庫中篩選得到的抗體基因克隆到大腸桿菌表達載體并在大腸桿菌中表達而得以克服。由于這一技術將抗體基因置于人力操縱下，抗體分子的大小、親和力的高低、細胞毒性的強弱、抗體是否接上其他有用的分子等都可根據治療和診斷的需要進行設計和操作。這是雜交瘤技術所不能替代的，其效率也是化學方法所不能比擬的。

相比之下，大腸桿菌表達系統受環境影響因素較少，可以比較穩定地表達抗體分子。在簡單的條件下，可以實現抗體大規模的表達與純化，從而在一定程度上提高了抗體生產的可控性，以節省大量的人力，財力和物力，實現更為可觀的經濟效應。同時大腸桿菌表達量遠超細胞的抗體表達量，因此，該技術平臺可以大大降低抗體的生產成本，以適用于不同層次、不同目的的檢測需要，同時也可以作為抗體原料生產平臺，為不同的用戶生產定制的抗體原料。借助該平臺的獨特的特點，在理論上該平臺可以用于針對任何抗原分子的篩選，可以不通過動物免疫篩選一些不具有免疫原性的抗原分子，從而體現了該系統具有極大的應用前景。此外，應用該技術平臺可以進一步建立基于新型基因工程IgG抗體的免疫檢測試劑方法。建立一套快速準確完備的對于各種食品、農產品添加劑及農藥/抗生素等殘留物、病原微生物以及醫學領域相關的免疫檢測、預警、預防科學的體系。

發明內容

本發明的目的是提供一種在大腸桿菌中制備基因工程IgG抗體的方法。在大腸桿菌中高效表達純化具有高親和力、強特異性的基因工程IgG抗體并建立基于基因工程IgG抗體的免疫學檢測方法，為最終開發基于基因工程IgG抗體的商品化免疫檢測試劑盒奠定了基礎。

本發明首先保護一種在大腸桿菌中制備基因工程IgG抗體的方法，通過噬菌體展示淘選和基因工程技術，分別構建抗體重鏈和輕鏈原核表達載體，然后將構建的表達載體轉化到大腸桿菌中，通過IPTG誘導表達基因工程IgG抗體。

同時保護一株通過噬菌體展示淘選和基因工程技術，分別構建抗體重鏈和輕鏈原核表達載體，然后將構建的表達載體轉化到大腸桿菌BL21中所獲得的表達基因工程IgG抗體的大腸桿菌菌株為大腸埃希氏菌（Escherichia coli）BAC-hFLIG-Ab-001，已于2016年06月20日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏號為CGMCC No.12641，地址為北京朝陽區北辰西路1號院。

其次保護一種在大腸桿菌中制備基因工程IgG抗體的方法所產生的基因工程IgG抗體。

所述的一種在大腸桿菌中制備基因工程IgG抗體的方法，是將噬菌體展示淘選得到的抗體重鏈和輕鏈可變區基因進行擴增，分別克隆到含有重鏈恒定區(CH)和輕鏈恒定區基因片段(CL)的原核表達載體中，并轉化大腸桿菌BL21（DE3）然后進行IPTG誘導表達純化，獲得具有抗原結合活性的基因工程IgG抗體。