[發(fā)明專利]用于識(shí)別Gremlin-1的核酸適配子及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610752160.0
• 申請(qǐng)日: 2016-08-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106399316B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-03-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郝志明;李倩;鄭曉燕;李爽;孫文剛;李漢超
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N15/115
• 分類號(hào): C12N15/115;G01N33/68
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 61200
• 代理人: 王霞

本發(fā)明公開(kāi)了一個(gè)用于識(shí)別Gremlin?1的核酸適配子及其應(yīng)用，通過(guò)SELEX方法成功篩選了特異性識(shí)別蛋白質(zhì)Gremlin?1的核酸適配子。結(jié)果表明，所篩選的核酸適配子可以特異性識(shí)別并結(jié)合蛋白質(zhì)Gremlin?1，且具有較高的特異性及靈敏性。經(jīng)過(guò)生物素標(biāo)記后的核酸適配子可以應(yīng)用于核酸蛋白質(zhì)印跡(South?Western blotting)、基于適配子的酶聯(lián)吸附試驗(yàn)(ELAA)、細(xì)胞及組織化學(xué)染色(Aptamer?based histochemistry and cytochemistry)。核酸適配子在親和力和特異性方面可與抗體媲美，甚至優(yōu)于抗體，有望被開(kāi)發(fā)成為體內(nèi)外檢測(cè)蛋白質(zhì)Gremlin?1的有力工具。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于識(shí)別Gremlin-1的核酸適配子及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

Gremlin-1是一種高度保守的，含184個(gè)氨基酸，可糖基化和磷酸化的分泌型蛋白質(zhì)。Gremlin-1可與骨形態(tài)形成蛋白(Bone morphogenetie protein，BMP)2、BMP4、BMP7，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR-2)，YWHAH和Slit蛋白結(jié)合，影響其生物學(xué)作用。Gremlin-1在胚胎發(fā)育、肢體形成、腎臟、肺臟等器官的發(fā)育過(guò)程中起著非常重要的作用。在個(gè)體發(fā)育完善后其表達(dá)逐漸減少，但是在有些病理過(guò)程如糖尿病腎病、特發(fā)性肺纖維化、青光眼等疾病中都能發(fā)現(xiàn)Gremlin-1表達(dá)的增高，且被證實(shí)Gremlin-1在這些疾病中有明顯的促纖維化作用。同時(shí)，Gremlin-1與很多惡性腫瘤的發(fā)生都有關(guān)系，如宮頸癌，肺癌等。

SELEX技術(shù)即指數(shù)富集的配基系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)(SystematicEv olution of Ligandsby Exponential Enrichment，SELEX)。利用該技術(shù)可以從隨機(jī)單鏈核酸序列庫(kù)中篩選出特異性與靶物質(zhì)高度親和的核酸適配體(Aptamer)。它的基本思想是：體外化學(xué)合成一個(gè)單鏈寡核苷酸庫(kù)，由于每個(gè)不同序列的單鏈核酸可以自身折疊形成特異的二級(jí)結(jié)構(gòu)，不同二級(jí)結(jié)構(gòu)的單鏈核酸就有可能與不同靶分子或一個(gè)靶分子中的不同位點(diǎn)依照熱力學(xué)原理結(jié)合，從而篩選出與靶分子結(jié)合的短鏈核酸即特異的適配子。核酸適配子能與多種目標(biāo)物質(zhì)高特異性、高選擇性地結(jié)合，因此在生物傳感器研究、疾病診斷、治療等方向有廣闊的應(yīng)用前景。核酸適配子在親和力和特異性方面可與抗體媲美，并且具有抗體所不具備的其他一些優(yōu)點(diǎn)，如篩選周期短，能應(yīng)用于大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)；生產(chǎn)成本低，穩(wěn)定性好，重復(fù)性強(qiáng)，生產(chǎn)中很少存在批次間的差異；沒(méi)有免疫原性，沒(méi)有毒性和明顯的副作用；易于化學(xué)修飾，可以在合成時(shí)精確、定點(diǎn)連接其他功能基團(tuán)和分子，如巰基、氨基和熒光素、生物素、酶或金屬微粒等。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種用于識(shí)別Gremlin-1的核酸適配子及其應(yīng)用。

本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：

本發(fā)明公開(kāi)了一種用于識(shí)別Gremlin-1的核酸適配子，該核酸適配子命名為G-ap49，其核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。

在所述核酸適配子G-ap49的核苷酸的5′端帶有生物素標(biāo)簽。

所述核酸適配子G-ap49不帶固定序列的結(jié)構(gòu)為：

所述核酸適配子G-ap49能特異性識(shí)別Gremlin-1全長(zhǎng)。

本發(fā)明還公開(kāi)了上述核酸適配子在制備識(shí)別Gremlin-1的檢測(cè)試劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明還公開(kāi)了上述核酸適配子在制備識(shí)別Gremlin-1的檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。

本發(fā)明還公開(kāi)了含有上述核酸適配子的檢測(cè)試劑。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果：