[發(fā)明專利]一種抗真菌環(huán)脂肽棘白菌素B的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610740409.6
• 申請日: 2016-08-27
• 公開（公告）號: CN107778358B
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張貴民;趙德立;薛國希
• 申請（專利權(quán)）人: 魯南制藥集團(tuán)股份有限公司
• 主分類號: C07K7/56
• 分類號: C07K7/56;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/22;C07K1/18
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1.一種抗真菌環(huán)脂肽棘白菌素B的制備方法，其特征在于，該方法包括下列步驟：

1)固液分離棘白菌素B發(fā)酵液，棘白菌素B即ECB，具體包括如下步驟：取菌絲體，加入助濾劑珍珠巖，板框過濾收集棘白菌素B菌餅；菌餅用原發(fā)酵液體積40-80％的丙酮浸泡，充分?jǐn)嚢瑁撋s劑活性炭以質(zhì)量體積比g/100ml計為0.5-2，攪拌均勻，直接板框過濾，收集濾液；

2)大孔吸附樹脂ADS-17或X-5富集，具體包括如下步驟：濾液加水調(diào)節(jié)丙酮濃度至20-40％，上大孔吸附樹脂ADS-17或X-5富集；

3)大孔吸附樹脂經(jīng)熱無水甲醇洗脫，合并洗脫液，具體包括如下步驟：無水甲醇加熱至45-50℃，直接洗脫大孔吸附樹脂，合并甲醇洗脫液；所述無水甲醇洗脫大孔吸附樹脂3～5個柱體積；

4)洗脫液濃縮，加氯化鈉溶液，攪拌降溫析晶，ECB粗品濾餅干燥，具體包括如下步驟：甲醇洗脫液濃縮至1倍柱體積左右，加等體積的以質(zhì)量體積比g/100ml計濃度為5％-15％的氯化鈉溶液，充分?jǐn)嚢杞禍刂?-10℃析晶，過濾得濕濾餅；濕濾餅于30-40℃干燥，得ECB粗品濾餅；

5)ECB粗品濾餅用甲醇過濾后，濾液上D318離子交換樹脂柱，具體包括如下步驟：ECB粗品濾餅用少量40-60％甲醇溶解，過濾掉不溶物，濾液上D318離子交換樹脂柱，D318離子交換樹脂柱用65-90％甲醇磷酸緩沖液梯度洗脫，HPLC檢測洗脫液ECB純度，收集并合并純度95％以上的部分；

6)D318離子交換樹脂柱洗脫液濃縮，加氯化鈉溶液，攪拌降溫析晶，ECB濾餅干燥，具體包括如下步驟：D318離子交換樹脂柱洗脫液真空濃縮至乳白色渾濁，加等體積5％氯化鈉溶液，充分?jǐn)嚢瑁禍刂?-10℃，沉淀物析出完全，直接過濾得濕濾餅；濕濾餅于30-40℃干燥12h得干品；

7)收集ECB干品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述棘白菌素B發(fā)酵液由高產(chǎn)菌株CGMCC No.8987發(fā)酵制備。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，該方法包括下列步驟：

1)固液分離ECB發(fā)酵液，取菌絲體，加入助濾劑珍珠巖，板框過濾收集棘白菌素B菌餅；菌餅用原發(fā)酵液體積的40-80％丙酮浸泡，充分?jǐn)嚢瑁尤胍再|(zhì)量體積比g/100ml計為0.5-2的脫色除雜劑活性炭，攪拌均勻，直接板框過濾，收集濾液；

2)濾液加水調(diào)節(jié)丙酮濃度至20-40％，上大孔吸附樹脂ADS-17或X-5富集；

3)無水甲醇加熱至50℃，直接洗脫大孔吸附樹脂3～5個柱體積，合并甲醇洗脫液；

4)甲醇洗脫液濃縮至1倍柱體積左右，加等體積的以質(zhì)量體積比g/100ml計濃度為5％-15％的氯化鈉溶液，充分?jǐn)嚢杞禍刂?-10℃，絮狀沉淀析出完全，直接過濾得濕濾餅，濾餅于30-40℃干燥，得ECB粗品濾餅；

5)ECB粗品濾餅用少量40-60％甲醇溶解，過濾掉不溶物，濾液上D318離子交換樹脂柱；用65-90％甲醇磷酸緩沖液梯度洗脫，HPLC檢測洗脫液ECB純度，收集并合并純度大于95％部分；

6)洗脫液真空濃縮至乳白色渾濁，加等體積5％氯化鈉溶液，充分?jǐn)嚢瑁禍刂?-10℃，沉淀物析出完全，直接過濾得濕濾餅，30-40℃干燥12h得干品；

7)收集ECB干品用于ECB轉(zhuǎn)化生產(chǎn)。