[發明專利]檢測腫瘤相關的50個熱點突變基因的捕獲文庫和試劑盒

有效

• 申請號: 201610738252.3
• 申請日: 2016-08-27
• 公開（公告）號: CN106283199B
• 公開（公告）日: 2018-06-19
• 發明（設計）人: 李宏志;李麗珍;劉琦;趙金銀;許立志;于闖;明鴻博
• 申請（專利權）人: 大連晶泰生物技術有限公司
• 主分類號: C40B50/06
• 分類號: C40B50/06;C40B40/08;C12Q1/6886
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 劉慧娟;李馨

本發明公開一種檢測腫瘤相關的50個熱點突變基因的試劑盒及方法，其針對腫瘤學研究相關的50個基因(包括致癌基因和抑癌基因)的207個熱點突變區域的捕獲方法，以及捕獲使用的液相雜交文庫的制備方法。具體為選取207個熱點突變區域的序列信息，設計PCR引物，利用PCR方法制備生物素標記的液相雜交捕獲文庫，利用其與構建好的靶標基因組DNA文庫雜交，對捕獲到的片段進行高通量測序和生物信息學分析，從而獲得樣本的核酸序列位點變異情況。本發明提供的方法，可獲得高質量的測序數據，具有更高捕獲效率和更好的靶標位點的均一性捕獲，解決了固相雜交的效率低、均一性差等缺點，大大的降低了測序成本。

技術領域

本發明屬于基因檢測技術領域，涉及一種用于檢測癌癥相關基因的試劑盒及檢測方法，具體涉及雜交的序列捕獲文庫的制備方法及技術。

背景技術

惡性腫瘤，俗稱癌癥，據統計癌癥已經成為我國城鄉居民的首要死因。近百年來，人們對于癌癥的研究一直沒有間斷，但具體病因仍然不能確定。隨著科學進步發展，科學家們發現癌基因與抑癌基因在癌癥發生上起到關鍵作用。癌基因(oncogene)一般可定義為某種基因，它的異常表達或表達產物的異常直接決定細胞惡性表型的產生。現已知道在腫瘤發生中，作為環境因素的病毒、化學致癌物和射線，它們作用于機體內的靶分子都是DNA，導致原癌基因的激活引發癌癥發生。癌基因可以促進細胞增殖與遷移，可以抑制細胞分化和凋亡，其在腫瘤細胞中大量表達。抑癌基因(tumor-suppressor gene)存在于正常細胞中，在被激活情況下它們具有抑制細胞增殖與遷移，調節細胞凋亡的作用，它們的丟失、突變或失去功能，使激活的癌基因發揮作用而致癌。近年來隨著基因組學的發展，不少基因檢測為主的研究項目已經取得標志性的階段成果，尤其對于癌癥的診斷預防具有不可替代的優勢。

20世紀初，人們認識到癌癥是一種遺傳病，并且在整個20世紀，科學家們開展了大量的細致、有突破性的研究來發掘癌癥的發生發展與基因之間的聯系。在研究的過程中，涌現了許多先進的技術和研究手段，使得科學家們更高效地找到了更多與癌癥相關的遺傳變異，其中細胞遺傳學技術逐漸嶄露頭角，例如熒光原位雜交(FISH)和比較基因組雜交(CGH)技術廣泛應用于鑒定染色體變異，揭示癌癥生物學的重要信息。隨后一代測序技術廣泛應用于目標區域測序，并且鑒定了許多熱點突變基因。到20世紀90年代，基因芯片技術的發展使得人們有機會更大規模地研究癌癥相關基因。