[發(fā)明專(zhuān)利]一種谷氨酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610737913.0
• 申請(qǐng)日: 2016-08-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107782683A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 甘宜梧;胡曉飛;譚柏清;董雯;王美麗
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/31
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/31;G01N21/78
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及臨床體外檢測(cè)試劑技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種谷氨酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

谷氨酸脫氫酶(GLDH或GDH)是一種主要存在于細(xì)胞線(xiàn)粒體基質(zhì)中的酶，以肝臟含量最高， 其次為腎臟、胰腺、腦、小腸粘膜及心臟等器官。其測(cè)定方法主要是連續(xù)監(jiān)測(cè)法。

正常人血液中GLDH活性很低，參考值范圍為：0～12.2U/L，在肝細(xì)胞發(fā)生壞死時(shí)進(jìn)入血液，因此肝臟疾病時(shí)尤其是涉及肝細(xì)胞線(xiàn)粒體損害時(shí)其活性升高顯著，故常用來(lái)檢查線(xiàn)粒體的受損程度，是肝實(shí)質(zhì)損害的敏感指標(biāo)。乙醇中毒伴肝細(xì)胞壞死、慢性肝炎、鹵烷致肝細(xì)胞中毒、缺血性肝炎時(shí)血清中GLDH的活性明顯升高。GLDH可用于阻塞性黃疸和非阻塞性黃疸鑒別、高血清轉(zhuǎn)氨酶的鑒別診斷、評(píng)價(jià)肝細(xì)胞損害的嚴(yán)重程度等。對(duì)于肝臟疾病的診斷，GLDH敏感性?xún)?yōu)于ALT（丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶）、AST（谷草轉(zhuǎn)氨酶）。

谷氨酸脫氫酶在NADH的存在下催化α-酮戊二酸與氨反應(yīng)生成谷氨酸、水，同時(shí)NADH被氧化，生成NAD⁺，引起340nm處吸光度的下降。在340nm處檢測(cè)吸光度之差，其變化程度與樣本中的GLDH活性成正比。該方法是一種無(wú)需預(yù)處理樣本、技術(shù)和設(shè)備要求不高、精密度和特異性更高的分析方法。由于該方法不需要昂貴的設(shè)備，可以實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，且可測(cè)定大量標(biāo)本，因此受到臨床廣泛推廣。但是普通的谷氨酸脫氫酶檢測(cè)試劑重復(fù)性不好，從而造成準(zhǔn)確度差浪費(fèi)試劑的不良后果。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種谷氨酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒。該試劑盒與常規(guī)的試劑盒相比，重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高，線(xiàn)性范圍好，有利于試劑在臨床上的推廣應(yīng)用。

本發(fā)明是通過(guò)以下措施實(shí)現(xiàn)的：

一種谷氨酸脫氫酶酶檢測(cè)試劑盒，其特征在于它包含試劑R1、試劑R2和校準(zhǔn)品，其中試劑R1組成為T(mén)ris緩沖液(100mmol/L)、α-酮戊二酸(10mmol/L)、疊氮化鈉(0.5%（W/V）；試劑R2組成為T(mén)ris緩沖液（100mmol/L）、氯化銨（100mmol/L）、還原型輔酶Ⅰ（0.5mmol/L）

AEO-9（0.1%-1%（V/V））、疊氮化鈉（0.5%（W/V））。

所述試劑R1和試劑R2在使用時(shí)的體積比例為R1：R2=4：1。

本發(fā)明所使用的校準(zhǔn)品為英國(guó)朗道公司生產(chǎn)的復(fù)合校準(zhǔn)品。

本發(fā)明的試劑盒在具有雙試劑功能的自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行，其具體使用方法為：加入生理鹽水、樣本或校準(zhǔn)品15μl，之后再加入R1試劑240μl預(yù)孵育5min后加入60μl的試劑R2，30秒后開(kāi)始記錄吸光度值A(chǔ)1，反應(yīng)5min后，讀取吸光度A2，并計(jì)算ΔA/min。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明提供的谷氨酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒，通過(guò)在試劑R2中加入AEO-9，通過(guò)分子中不同部分分別對(duì)于兩相的親和，使兩相均將其看作本相的成分，分子排列在兩相之間，使兩相的表面相當(dāng)于轉(zhuǎn)入分子內(nèi)部，從而降低表面張力。由于兩相都將其看作本相的一個(gè)組分，就相當(dāng)于兩個(gè)相與表面活性劑分子都沒(méi)有形成界面，就相當(dāng)于通過(guò)這種方式部分的消滅了兩個(gè)相的界面，就降低了表面張力和表面自由能，從而解決了試劑重復(fù)性不好這一難題，卻不會(huì)對(duì)試劑的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確度產(chǎn)生影響，有利于該試劑在市場(chǎng)中進(jìn)一步的推廣。

附圖說(shuō)明

圖1 實(shí)施例2準(zhǔn)確度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果與對(duì)照組檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性；

圖2 實(shí)施例3準(zhǔn)確度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果與對(duì)照組檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性；

圖3 實(shí)施例4準(zhǔn)確度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果與對(duì)照組檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性；

圖4 實(shí)施例1-4線(xiàn)性相關(guān)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果；

圖5 實(shí)施例1-4穩(wěn)定性驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果；

圖6 實(shí)施例1-4重復(fù)性驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果。

具體實(shí)施方式

為了更好的理解本發(fā)明，下面結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。

實(shí)施例1

市場(chǎng)上獲得認(rèn)可的一種準(zhǔn)確度優(yōu)異的谷氨酸脫氫酶試劑盒，它包括試劑R1、試劑R2、校準(zhǔn)品。

其中試劑R1組成為：

Tris緩沖液100mmol/L

α-酮戊二酸10mmol/L

疊氮化鈉0.5%（W/V）

試劑R2組成為：

Tris緩沖液100mmol/L

氯化銨100mmol/L

還原型輔酶Ⅰ 0.5mmol/L

疊氮化鈉0.5%（W/V）。

本實(shí)施例描述的試劑盒，在使用時(shí)，其測(cè)定方法是采用具有雙試劑功能的東芝120自動(dòng)分析儀，操作如下：